蕨麻对大鼠缺血心肌的保护作用及其差异蛋白质表达谱的影响

论文摘要

目的:研究蕨麻乙醇提取物对结扎大鼠冠状动脉所致急性心肌缺血损伤的保护作用及其差异蛋白质表达谱的影响方法:选取雄性SD大鼠随机分为手术对照组,模型组,恬尔心组（恬尔心,diltiazem, 30mg/kg,）,蕨麻乙醇提取物7.2g/kg（jmg）,3.6g/kg（jmz）,1.8g/kg（jmd）干预组。手术对照组给予3‰羧甲基纤维素（CMC）。连续灌胃10天。结扎在体大鼠冠状动脉致急性心肌缺血损伤模型。缺血时间持续30min。记录各处理组动物心电图,对急性心肌缺血大鼠心电图ST段的改变进行评价;采用透射电镜技术检测急性心肌缺血损伤以后及药物干预后心肌细胞超微结构的变化;取血清检测LDH、CK、SOD活性及MDA含量;测定各处理组动物心功能的变化;用强阴离子交换芯片（SAX-2）并用弱阳离子交换芯片（WCX-2）结合表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术分析大鼠急性心肌缺血损伤后不同处理组血清中蛋白质表达谱的改变。结果:1.心电图ST段的变化:结果显示蕨麻醇提物显著降低了急性心肌缺血损伤导致的大鼠心电图ST段升高（p<0.05）。2.心肌超微结构的变化:假手术组:心肌肌原纤维排列整齐,肌丝清晰;线粒体结构完整;线粒体糖原颗粒丰富;细胞核和核仁显示良好,呈黑色。模型组:核的一端严重水肿,线粒体糖原显著减少,大部分线粒体嵴和膜融合或消失,肌纤维部分排列紊乱。低倍视野下核的一端及肌纤维束之间明显水肿,肌节排列稍紊乱。恬尔心组:核的一端糖原颗粒稍减少,线粒体有轻度髓样化,线粒体少部分嵴和膜融合。肌节排列整齐。蕨麻醇提物高剂量组:线粒体部分嵴和膜融合,部分线粒体嵴消失,糖原稍减少,部分核周隙扩张,肌节排列稍紊乱。蕨麻醇提物中剂量组:线粒体有空泡化现象,糖原数量减少明显,核周隙部分扩张,部分肌节排列紊乱。蕨麻醇提物低剂量组:核的一端轻度水肿,核周隙扩张,大部分嵴和膜融合,线粒体有髓样化改变,部分肌节排列紊乱。3.心功能的变化:LAD结扎后,蕨麻醇提物给药组（高剂量及中剂量组）,恬尔心组各项心功能指标均优于模型组（P<0.01）。蕨麻醇提物低剂量组各项心功能指标与模型组相比较无明显差异（p>0.05）。蕨麻醇提物高剂量组和恬尔心组相比较各项心功能指标无显著性差异（p>0.05）。蕨麻醇提物高剂量组和蕨麻醇提物中剂量组对各项心功能指标改善表现出剂量依赖性。4.生化指标的改变:与急性心肌缺血模型组比较,蕨麻乙醇提取物高、中剂量组及恬尔心组可显著降低急性心肌缺血模型大鼠血清中LDH活性（P<0.01）、CK活性（P<0.05）,提高SOD活力（P<0.05）,减少MDA的产生（P<0.01）;蕨麻醇提物高剂量组和恬尔心组对大鼠血清中心肌酶活力的影响无显著差异。蕨麻乙醇提取物低剂量组与急性心肌缺血模型组相比较,大鼠血清中心肌酶活性差别无显著性（P>0.05）。5.蛋白质芯片结果:（1）WCX-2芯片共获得338个血清蛋白质峰;SAX-2芯片共获得348个血清蛋白质峰。在6个组中,SAX-2芯片所捕获的血清蛋白质数平均较WCX-2芯片所获得的高出2.9%。此外,SAX-2芯片上捕获的血清蛋白质总数中,133个（38.2%）的蛋白质峰也出现在WCX-2芯片上。（2）血清中检测到的差异蛋白质:在WCX-2芯片上,手术对照组及各给药组检测到27个蛋白质峰的相对强度与模型组相比有显著性差异（P<0.05）;另有55个蛋白质峰在模型组未检到。在SAX-2芯片上,手术对照组及各给药组检测到16个蛋白质峰的相对强度与模型组相比有显著性差异（P<0.05）,并发现47个蛋白质峰在模型组未检到。（3）不同处理组差异蛋白质的变化:在WCX-2芯片上,3266 Da、4472 Da蛋白质峰在手术对照组,蕨麻高剂量组和蕨麻中剂量组都可以检测到。4972Da蛋白质峰在恬尔心组、蕨麻高剂量组、蕨麻中剂量组手术对照组都可以检测到。4515Da蛋白质峰在蕨麻中剂量组和蕨麻低剂量组都可以检测到。4010Da蛋白质峰在恬尔心组和蕨麻中剂量组都可以检测到。8326Da、8828Da蛋白质峰在手术对照组和蕨麻中剂量组都可以检测到。在SAX-2芯片上,3515Da、4194Da蛋白质峰在手术对照组和恬尔心组均可以检测到。4957 Da蛋白质峰在手术对照组和蕨麻中剂量组均可以检测到。4165Da蛋白质峰在手术对照组和蕨麻低剂量组都可以检测到。7694Da蛋白质峰在手术对照组和恬尔心组及蕨麻中剂量组均可以检测到。4166 Da蛋白质峰在蕨麻高剂量组和蕨麻中剂量组均可以检测到。4212 Da蛋白质峰在蕨麻高剂量组和蕨麻低剂量组均可以检测到。4007Da蛋白质峰在恬尔心组和蕨麻高剂量组均可以检测到。（4）心肌损伤后表达上调或下调的差异蛋白质:与模型组血清蛋白质谱相比,心肌损伤后有47个蛋白质表达增高,有45个蛋白质表达降低。（5）对损伤组和正常组大鼠血清差异蛋白质进行对比分析,发现缺血30分钟,损伤组质/荷（M/Z）比为4972Da的蛋白质相对含量明显高于对照组（P<0.01）。蕨麻干预后,该蛋白质峰随药物浓度升高而降低,至高剂量组时降至对照组水平,提示4972Da蛋白质可能是抗心肌缺血再灌注损伤药物作用靶点之一,有待进一步研究证实。结论:1.蕨麻乙醇提取物能够显著保护急性心肌缺血所致心肌损伤,能保护心肌组织的超微结构,改善心脏功能。2.心肌损伤可引起血清蛋白质表达谱变化。不同处理组蛋白质表达谱存在差异,提示血清中出现的部分差异蛋白质可能为心肌损伤诱导的基因表达产物。3.蕨麻干预后,心肌损伤后异常表达的蛋白质（4972Da）表达下降。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 蕨麻对大鼠缺血心肌的保护作用及其差异蛋白质表达谱的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 心脏缺血性损伤的分子机制
• 致谢
• 个人简历