论文摘要
从离体的植物器官或组织中获得再生植株是进行基因转化等其它生物技术研究的基础和前提。苜蓿是重要的豆科饲料牧草,为进一步完善苜蓿受体再生系统,使该系统具备重复性强、操作简便、培养周期短、再生率高和遗传性稳定的条件,为转基因苜蓿提供程序化技术,达到产业化规模,做好技术储备。利用植物作为疫苗载体生产口服疫苗,使异源的抗原蛋白能够在植物细胞中表达,而且植物表达的抗原蛋白,跟天然抗原一样,能够引起动物和人的免疫反应。通过对10种不同苜蓿的栽培品种再生体系的比较研究;用农杆菌介导法将重组质粒pBI121-STI-STII-LTB侵染5-6日龄的杂花苜蓿下胚轴,建立植物基因转化方法及转基因苜蓿免疫小鼠检测动物免疫原性反应的方法。结果通过实验筛选出易于再生的费纳尔,金皇后,赛特6号3个苜蓿栽培品种。转基因苜蓿植株,经PCR、RT-PCR检测分析表明,转基因苜蓿植株基因组中可初步检测到STI-STII-LTB融合基因;提取转基因苜蓿植株总蛋白质,SDS-PAGE结果显示,转基因植株表达了重组抗原蛋白,Western-dot免疫初步检测验证了转基因植株表达的重组抗原有一定的免疫原性,经过动物试验和间接ELISA检测,转基因苜蓿免疫的母鼠阳性与阴性OD比值未能达到阳性、阴性的判定比值2。结果表明:通过实验筛选出易于再生的费纳尔,金皇后,赛特6号3个苜蓿栽培品种,并成功诱导出转基因苜蓿苗,完成转基因苜蓿植株的再生和移栽,同时得到了抗性转基因苜蓿植株。并初步探索转基因苜蓿植株对实验动物母鼠的免疫反应原性的具体途径和方法。从而为解决疾病防控提供科学、有效的理论依据和参考价值。
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