苎麻微卫星引物开发与杂种优势预测初步研究

论文摘要

本研究采用三种方法分离了39个苎麻微卫星序列,用Primer Premier 5.0设计了39对微卫星引物。选取26个自交系亲本组配了28个杂交组合,调查了亲本与F1代的主要农艺性状并分析了它们的相关性。并用30对引物分析了26个亲本的分子遗传距离,分析了遗传距离与杂种优势的相关性。主要结果如下:1)利用EST数据库搜索开发SSR引物。搜索NCBI中苎麻EST数据库,从125条EST序列中筛选得到8条含SSR序列,根据所得序列设计了8对SSR引物。2)利用ISSR技术结合抑制PCR和反向PCR开发SSR引物。使用10条ISSR引物,对基因组DNA扩增后片段测序,利用抑制PCR和反向PCR进行染色体步行。利用抑制PCR开发引物10对,反向PCR开发引物9对。3)采用AFLP扩增与磁珠富集相结合的方法,AFLP预扩的片段加接头和生物素标记的探针（AC）15杂交,用磁珠富集含微卫星序列的DNA片段,得到微卫星序列文库,用PCR法对文库进行筛选,选出25个克隆测序,得到20对SSR引物。4)用开发的30对SSR引物分析26个自交系亲本的遗传距离,运用SAS 8.0对遗传距离与F1代的产量与品质性状进行相关分析,结果表明,它们之间没有显著的相关性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩写词表
• 1 文献综述
• 1.1 分子标记与苎麻分子标记的研究进展
• 1.1.1 常用的分子标记种类
• 1.1.2 苎麻分子标记的发展
• 1.2 微卫星分离研究进展
• 1.2.1 经典的微卫星引物开发方法
• 1.2.2 采用富集步骤的方法
• 1.2.3 从已公布的核酸数据库中开发
• 1.2.4 不同作物共用引物
• 1.3 杂种优势机理及研究进展
• 1.3.1 苎麻杂种优势研究进展
• 1.3.2 分子标记遗传差异与杂种优势的相关性
• 2 苎麻微卫星引物的开发
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 从已公布的数据库中搜索
• 2.1.2 利用ISSR结合抑制PCR和反向PCR开发SSR引物
• 2.1.3 磁珠富集法
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 EST序列中含SSR序列的搜索与引物设计
• 2.2.2 ISSR结合抑制PCR技术富集SSR
• 2.2.3 反向PCR扩增结果分析
• 2.2.4 磁珠富集法结果分析
• 2.3 讨论
• 2.3.1 高质量苎麻基因组DNA的提取
• 2.3.2 利用EST数据库开发微卫星引物
• 2.3.3 采用ISSR结合抑制PCR进行SSR引物开发
• 2.3.4 利用反向PCR开发SSR引物
• 2.3.5 磁珠富集法
• 2.3.6 三种开发方法的比较
• 3 微卫星标记在杂种优势预测中的初步研究
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 杂交亲本的组配设计和田间试验设计
• 3.1.3 产量性状的测定
• 3.1.4 纤维品质测定
• 3.1.5 亲本遗传距离的聚类分析
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 主要农艺性状的杂种优势分析
• 3.2.2.SSR标记聚类分析
• 3.2.3 遗传距离与杂种优势的相关性分析
• 3.3 讨论
• 3.3.1 26个自交系材料的SSR标记的聚类分析
• 3.3.2 苎麻自交系杂交后代的杂种优势
• 3.3.3 分子标记用于杂种优势预测的不足
• 4 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录