论文摘要
第一部分TLR4/NF-KB信号通路在双重打击致大鼠急性肺损伤中的作用目的：建立大鼠胸部创伤-失血性休克双重打击急性肺损伤动物模型,探讨TLR4/NF-κB信号通路在双重打击致大鼠急性肺损伤发生、发展过程中的作用。方法：健康雄性SPF级SD大鼠40只,体重240～280g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组（n=10）：假手术（Sham）组；胸部创伤（T）组；失血性休克（HS）组和胸部创伤-失血性休克组双重打击（THS）组。Sham组仅行股动、静脉穿刺,不创伤、不放血；T组建立胸部创伤模型；HS组建立失血性休克模型；THS组建立胸部创伤一失血性休克双重打击急性肺损伤模型。观察各组动物心率（HR）、呼吸（RR）和平均动脉压（MAP）的变化。6h后处死大鼠,取动脉血样行动脉血气分析；运用蛋白质免疫印迹法（Western blotting）和免疫组织化学法（immunochisto-chemistry）检测肺组织TOLL样受体4（toll like receptor4, TLR4）和核因子κB （nuclear factor-κB, NF-κB）的表达；运用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assays, ELISA）方法测定血清中细胞因子肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）、白介素6（interleukin6, IL-6）和白介素l p（interleukin1β, IL-lβ）水平；光镜和透射电镜观察肺组织病理学变化。结果：与Sham组比较,THS组、T组和HS组HR、RR、MAP和Pa02显著降低、肺组织TLR4和NF-κB的表达升高、血清中TNF-α、IL-6和IL-1p水平明显增高（P<0.05）；与T、HS组比较,THS组HR, RR、MAP和Pa02降低、肺组织TLR4和NF-κB的表达以及血清中TNF-α、IL-6和IL-1β水平进一步升高（P<0.05）；THS组肺组织病理损伤程度亦较T、HS组明显加重。结论：TLR4/NF-κB是介导双重打击致ALI的重要信号通路,在ALI的发生、发展中起促进作用。第二部分盐酸戊乙奎醚对双重打击致急性肺损伤大鼠的保护作用目的：观察盐酸戊乙奎醚对双重打击致急性肺损伤时动脉血气、肺通透性指数（LPI）、支气管肺泡灌洗液（BALF）中蛋白含量及中性粒细胞百分比（PMN）、髓过氧化物酶活性（MPO）的活性、肺含水量（LC）及湿/干重（W/D）比值的影响,探讨其对急性肺损伤的保护作用。方法：健康雄性SD大鼠40只,体重250～300g,按随机数字表法分为4组（n=10）：假手术（Sham）组；双重打击（THS）组；盐酸戊乙奎醚预防（P1）组和盐酸戊乙奎醚治疗（P2）组。建立双重打击致ALI大鼠模型,6h后采集血标本和肺组织标本。测定动脉血气、LPI、BALF中蛋白含量及PMN计数、MPO活性、LC及W/D比值、光镜下观察肺组织病理形态学改变、电镜下观察细胞超微结构改变。结果：双重打击ALI组大鼠LPI、BALF中蛋白含量、PMN、MPO、LC、W/D比值及动脉血PaCO2和乳酸值明显升高（P<0.01）,动脉血pH和Pa02值则明显降低（P<0.01）；预防和治疗性给予盐酸戊乙奎醚后能显著提高ALI大鼠动脉血pH和Pa02（P<0.01或P<0.05）,显著降低ALI大鼠LPL、BALF中蛋白含量、PMN、MPO、LC.W/D比值及动脉血PaCO2和乳酸值（P<0.01或P<0.05）；明显改善肺组织病理损伤情况。结论：预防性和治疗性应用盐酸戊乙奎醚对双重打击所致ALI具有保护作用。第三部分盐酸戊乙奎醚对双重打击致急性肺损伤时TLR4/p38MAPK信号转导通路的影响目的：通过建立胸部创伤-失血性休克双重打击急性肺损伤大鼠模型,探讨盐酸戊乙奎醚对双重打击致急性肺损伤时TLR4/p38MAPK信号转导通路的影响。方法：健康雄性SD大鼠40只,体重250～300g,按随机数字表法随机分为4组（n=10）：假手术（Sham）组；双重打击急性肺损伤（THS）组；盐酸戊乙奎醚预防（P1）组和盐酸戊乙奎醚治疗（P2）组。建立胸部创伤失血性休克双重打击急性肺损伤大鼠模型。6h后处死大鼠,采集血和肺组织标本。免疫荧光与Western blotting法检测肺组织TLR4和p38MAPK蛋白的表达；凝胶电迁移法（EMSA）检测肺组织中蛋白激酶1（AP-1）和核因子κB （NF-κB）的DNA结合活性；运用ELISA法测定血清中TNF-α、IL-6和IL-1β的水平。结果：与Sham组比,THS组TLR4和p38MAPK蛋白表达明显增加（P<0.01）, NF-κB和AP-1的活性明显增强（P<0.01）,TNF-α、IL-6和IL-1β表达升高（P<0.01）；与THS组比,P1组和P2组TLR4和p38MAPK蛋白表达明显减少（P<0.01）,NF-κB和AP-1的活性明显降低（P<0.01）,血清中TNF-α、IL-6和IL-1β表达水平降低（P<0.01）。结论：盐酸戊乙奎醚对双重打击导致的ALI大鼠的保护作用可能与抑制TLR4和p38MAPK蛋白的表达,降低NF-κB和AP-1的活性,减少炎性细胞因子释放,遏制炎症瀑布反应,进而减轻组织的炎性损伤有关。
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