抑癌基因TSG101及其剪接变异体在乳腺癌中表达的研究

论文摘要

目的:研究乳腺癌组织中抑癌基因TSG101及其四种剪接变异体的表达规律及突变,探讨此基因在乳腺癌发生发展过程中扮演的角色。 方法:对手术切除的24例新鲜乳腺癌组织进行总RNA抽提,设计5对针对TSG101基因全长及其四种剪接变异体（VA、VB、VC和VD）特异引物作RT-PCR,PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳观察分析目的产物,设计引物对TSG101基因全长PCR产物进行测序（663bp～1276bp）,结果与基因库TSG101基因序列比对分析。四种剪接变异体用各自的扩增引物测序,以确定获得的为目的产物。 结果:在24例组织中均扩增出了TSG101全长及四种剪接变异体片断。24例乳腺癌组织中TSG101剪接变异体C表达的差异最小,剪接变异体A、B及TSG101全长的表达差异次之,剪接变异体D的表达差异最大。测序结果24例组织中20例（83.3%）经序列比对与基因库的TSG101mRNA序列100%一致,另4例（16.7%）均于TSG101基因第4外显子mRNA第798bp处存在“C→T”杂合性点突变。 结论:1、24例乳腺癌组织均有TSG101基因全长及VA、VB、VC和VD四种剪接变异体的表达,各成分的表达存在不同程度的差异,以VC差异最小,VD差异最大。上述差异与乳腺癌生物学特性的关系有待进一步研究和阐明。2、16.7%（4/24）乳腺癌病例存在TSG101mRNA第798bp位碱基“C→T”的杂合性点突变,此发现为国内外首次报道,其可能为乳腺癌发生的分子遗传基础提供了新线索。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 一 乳腺癌发病概况
• 二 肿瘤易感基因与乳腺癌
• 1 BRCA基因异常与乳腺癌
• 2 Rb基因异常与乳腺癌
• 3 p53基因异常与乳腺癌
• 4 nm23基因异常与乳腺癌
• 三 剪接变异体与肿瘤发生
• 1 RNA剪接的过程
• 2 不同的剪接发生的原因
• 四 TSG101基因研究概况
• 1 TSG101基因概述
• 1.1 TSG101基因的发现
• 1.2 TSG101基因的分子结构特征
• 2 TSG101基因与肿瘤发生有关的功能
• 2.1 转录抑制因子功能
• 2.2 与p53／MDM2相互作用而参与转录调控
• 2.3 与细胞生长密切相关
• 五 TSG101基因及其剪接变异体研究概况
• 六 本研究的主要内容及意义
• 材料与方法
• 第一部分 主要试剂与材料
• 一 主要实验材料与试剂
• 二 主要试剂的配制方法
• 三 主要仪器及设备
• 第二部分 实验方法
• 一 技术路线
• 二 标本的选取
• 三 标本总RNA提取
• 四 总RNA质量鉴定
• 五 引物的设计与合成
• 六 引物的配制
• 七 RT-PCR
• 八 PCR产物琼脂糖凝胶电泳
• 九 凝胶成像
• 十 测序与分析
• 实验结果
• 一 标本总RNA质量鉴定结果
• 二 琼脂糖凝胶电泳鉴定RT-PCR结果
• 三 测序结果及分析
• 讨论
• 一 TSG101基因及其剪接变异体在乳腺癌中的表达及其意义探讨
• 二 TSG101基因全长PCR产物测序结果分析
• 三 意义及展望
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 英文缩略词
• 研究生在读期间发表的文章
• 致谢