海带岩藻聚糖的提取纯化及抗氧化活性研究

海带岩藻聚糖的提取纯化及抗氧化活性研究

论文摘要

岩藻聚糖分布在褐藻细胞间,富含硫酸根和L-岩藻糖,还含有不同比例的木糖、葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖以及糖醛酸等。和其它硫酸多糖一样,岩藻聚糖具有多种生物活性,如抗病毒、抗凝血、抑制肿瘤以及调节免疫功能等。岩藻聚糖的生物活性与其结构相关,包括硫酸根含量及其在L-岩藻糖上的结合位点、单糖组成及比例、分支结构、分子量大小等。为此,人们对岩藻聚糖开展了许多相关的研究,并且逐渐把岩藻聚糖的结构分析和生物活性研究相结合,更好的解释了岩藻聚糖在生物活性方面的机理。海带是褐藻家族的重要成员之一,我国是世界上海带种植的大国,海带是我国沿海省份重要的经济作物,特别是在福建省。为了提升海带产品的附加值、改善海带产业的结构,对海带的深加工是一条重要途径。海带岩藻聚糖的高效生物活性,决定了利用海带提取岩藻聚糖开发保健食品、药品具有广阔的前景。近来,岩藻聚糖抗氧化活性逐渐引起人们的注意,是研究岩藻聚糖的热点之一。本文对海带岩藻聚糖开展了以下几方面的研究工作:1、提取工艺的研究:研究了加水量、pH值、提取时间以及温度对提取岩藻聚糖的影响,并建立正交实验,借助正交分析得出最佳提取工艺。结果表明,在温度80℃,加水量1:25,时间3h,pH 4的条件下可以得到较为理想的实验结果。粗品岩藻聚糖的得率为5.51%,L-岩藻糖含量为15.02%,硫酸根含量为18.25%。2、对岩藻聚糖进行理化成分分析:采用微量凯氏定氮法测定了岩藻聚糖中的蛋白质含量;测定了灰分含量并利用超滤法脱出其中的盐分及小分子杂质;利用氢化物-原子荧光光谱法(HG-AFS)分析检测其As、Hg含量;利用气相色谱(GC)分析岩藻聚糖中的单糖成分。结果表明:蛋白质含量为6.9%,灰分含量为27.96%;脱盐前,As、Hg含量分别为2.78mg/Kg、0.125 mg/Kg,脱盐后分别为2.26 mg/Kg、0.119 mg/Kg。单糖组分为L(-)-岩藻糖、D-木糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖,含量分别为40.62%、2.76%、25.88%、22.10%、8.64%(W/W)。3、研究了竞争性螯合剂—EDTA、植酸对脱出岩藻聚糖中重金属的影响,以及在不同pH条件下结合超滤脱盐技术脱除重金属的规律。结果表明,在加入竞争性螯合剂EDTA和植酸的条件下,在提取过程中可以有效地降低Mg、Ca、Mn、Zn、As、Ag、Cd、Pb金属元素在岩藻聚糖中的残留,但对Hg、Fe、Cu、Ba等四种金属元素效果不理想。而且螯合剂EDTA比植酸螯合效果好。4、采用DEAE-Cellulose52树脂对岩藻聚糖进行了分级,得到组分HF1和HF2;利用酸法制备得到低聚岩藻聚糖。HF1和HF2中糖醛酸含量分别为18.834±1.144%、5.878±0.402%,硫酸根含量分别为27.631±0.229%、26.328±0.665%,L-岩藻糖含量分别为44.197%、81.119%;低聚糖中L-岩藻糖的含量从未水解前的40.621%降到了13.033%。组分HF1和低聚岩藻聚糖中的硫酸根在L-吡喃岩藻糖的C-2和C-4位点都有结合,而组分HF2中的硫酸根主要结合在吡喃岩藻糖的C-4位点上。5、研究岩藻聚糖抗氧化活性发现,在抑制羟基自由基活性中,HF1的IC50为7.6mg/mL ,HF2的IC50为5.2mg/mL;高聚岩藻聚糖的IC50=8.9mg/mL,而低聚岩藻聚糖几乎已经没有了抑制羟基自由基的能力。各组分没有显示具有抗脂质体过氧化活性;抑制亚油酸体系氧化中,各组分在一定的时间段内在低浓度下具有抑制效果,而高浓度则没有。低聚岩藻聚糖的抑制持续时间比高聚糖的要长,高糖醛酸含量的组分具有更好的抑制效果。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 引言
  • 1.1 岩藻聚糖的来源与分布
  • 1.1.1 提取岩藻聚糖的材料
  • 1.1.2 岩藻聚糖在藻体内的分布
  • 1.2 岩藻聚糖的提取与纯化
  • 1.2.1 岩藻聚糖的提取
  • 1.2.2 岩藻聚糖的纯化
  • 1.3 岩藻聚糖的化学成分及结构研究
  • 1.3.1 岩藻聚糖的化学组分研究
  • 1.3.2 岩藻聚糖的结构研究
  • 1.4 岩藻聚糖的生物活性
  • 1.4.1 抗凝血活性
  • 1.4.2 抗肿瘤活性
  • 1.4.3 调节免疫机能活性
  • 1.4.4 抗病毒活性
  • 1.4.5 其它一些活性
  • 1.5 展望
  • 1.6 研究目的与内容
  • 1.6.1 研究的目的与意义
  • 1.6.2 研究内容、技术路线
  • 第二章 岩藻聚糖提取工艺的研究
  • 2.1 实验材料
  • 2.1.1 实验原料
  • 2.1.2 实验试剂
  • 2.1.3 实验仪器
  • 2.2 实验方法
  • 2.2.1 岩藻聚糖的提取工艺
  • 2.2.2 岩藻聚糖提取工艺的优化
  • 2.2.3 总糖含量检测
  • 2.2.4 岩藻糖含量的测定
  • 2.2.5 硫酸根含量检测
  • 2.3 结果与讨论
  • 2.3.1 单因素实验
  • 2.3.2 正交实验结果与分析
  • 2.3.3 正交实验结果的验证
  • 2.4 本章小结
  • 第三章 岩藻聚糖理化成分分析
  • 3.1 实验材料
  • 3.1.1 实验试剂
  • 3.1.2 实验仪器
  • 3.2 实验方法
  • 3.2.1 蛋白质含量
  • 3.2.2 灰分
  • 3.2.3 As、Hg 含量
  • 3.2.4 糖醛酸含量
  • 3.2.5 单糖成分分析
  • 3.3 实验结果与讨论
  • 3.3.1 蛋白质含量
  • 3.3.2 灰分
  • 3.3.3 As、Hg 含量分析
  • 3.3.4 糖醛酸含量测定
  • 3.3.5 单糖成分分析
  • 3.4 本章小结
  • 第四章 岩藻聚糖中重金属含量检测及脱出规律的研究
  • 4.1 实验材料
  • 4.1.1 实验试剂
  • 4.1.2 实验仪器
  • 4.2 实验方法
  • 4.2.1 酸处理结合超滤法脱重金属
  • 4.2.2 低重金属含量岩藻聚糖提取工艺
  • 4.2.3 样品消解
  • 4.2.4 标准曲线的制作
  • 4.3 实验结果与讨论
  • 4.3.1 超滤脱盐
  • 4.3.2 pH 值对脱除岩藻聚糖中As、Hg 元素的影响
  • 4.3.3 竞争性螯合剂对脱除岩藻聚糖中的重金属的影响
  • 4.4 本章小结
  • 第五章 岩藻聚糖的分级纯化及低聚糖的制备
  • 5.1 实验材料
  • 5.1.1 实验试剂
  • 5.1.2 实验仪器
  • 5.2 实验方法
  • 5.2.1 岩藻聚糖的分级纯化
  • 5.2.2 酸解制备低聚岩藻聚糖(LF)
  • 5.2.3 葡聚糖凝胶检测低聚糖分子量分布
  • 5.2.4 分离脱落的硫酸根
  • 5.2.5 单糖成分分析
  • 5.2.6 糖醛酸含量检测
  • 5.2.7 硫酸根含量检测
  • 5.2.8 红外光谱分析
  • 5.3 实验结果及讨论
  • 5.3.1 DEAE-Cellulose 52 分级纯化
  • 5.3.2 还原糖的变化
  • 5.3.3 Sephadex G-15 分离硫酸根
  • 5.3.4 硫酸根脱落的动力学变化
  • 5.3.5 岩藻聚糖水解产物的分子量分布
  • 5.3.6 多糖成分分析
  • 5.3.7 红外光谱分析
  • 5.4 本章小结
  • 第六章 抗氧化活性研究
  • 6.1 实验材料
  • 6.1.1 实验试剂
  • 6.1.2 实验仪器
  • 6.2 实验方法
  • 6.2.1 清除羟自由基(·OH)能力
  • 6.2.2 抗脂质体过氧化活性的测定
  • 6.2.3 抗亚油酸体系氧化作用
  • 6.3 实验结果与讨论
  • 6.3.1 抑制·OH 活性
  • 6.3.2 抗脂质体过氧化活性
  • 6.3.3 抗亚油酸体系氧化作用
  • 6.4 本章小结
  • 第七章 讨论与结论
  • 致谢
  • 参考文献
  • 在学期间发表的学术论文
  • 相关论文文献

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