论文摘要
目的用真核转录载体pSilencer2.0构建针对survivin基因的两种重组干扰载体（ psilencer2.0-SVV1、psilencer2.0-SVV2 ）,并转染膀胱肿瘤细胞系EJ细胞株,通过RNA干扰（RNAi）阻断EJ细胞中survivin基因的表达,筛选有效抑制suvivin表达的重组干扰载体。并检测其对EJ细胞增殖、细胞周期、凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法将设计、合成的DNA正义链及反义链变性、退火,形成的双链DNA与pSilencer2.0线性质粒以T4 DNA连接酶连接。重组质粒经酶切、DNA测序鉴定后,用脂质体法转染EJ细胞,通过RT-PCR、免疫印迹检测干扰效果。MTT法检测对细胞生长增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡的变化,RT-PCR检测对caspase-3、bax及bcl-2基因的表达影响。结果（1）酶切及测序证实设计合成的DNA已正确插入载体。（2）RT-PCR及免疫印迹实验检测表明: pSilencer2.0-SVV1、pSilencer2.0-SVV2重组载体均能有效阻断EJ细胞中survivin基因的表达,使survivin基因在mRNA和蛋白水平上的表达明显下调（ P < 0.05）,pSilencer2.0-SVV2抑制效果更佳。（3）转染后的EJ细胞生长速度明显变慢,处于细胞G2/M期数目增多,凋亡率增强,caspase-3及bcl-2基因表达无明显变化（ P > 0.05）、bax表达明显增强（ P<0.05）。结论重组质粒psilencer2.0-SVV2转染膀胱癌细胞株后可靶向沉默survivin基因表达,并可促EJ细胞凋亡,改变其生物学行为,在膀胱癌的基因治疗中具有一定的价值。
论文目录
相关论文文献
- [1].斑蝥酸钠对体外培养的EJ细胞的实验研究[J]. 中国医药导报 2013(24)
- [2].浅议工程项目的风险管理——以EJ工程为例[J]. 中国高新技术企业 2012(07)
- [3].白花蛇舌草对膀胱癌EJ细胞株的增殖抑制作用及其机制[J]. 中国老年学杂志 2009(12)
- [4].斑蝥酸钠对膀胱癌EJ细胞株毒性作用的研究[J]. 江苏大学学报(医学版) 2010(05)
- [5].浅谈工程项目施工中的成本管理——以EJ工程为例[J]. 中小企业管理与科技(下旬刊) 2012(01)
- [6].苦参碱对人膀胱癌EJ细胞株凋亡的影响及机制[J]. 山东医药 2010(11)
- [7].尼美舒利联合表阿霉素对人膀胱癌EJ细胞的体外作用[J]. 实用医学杂志 2009(02)
- [8].双调控溶瘤腺病毒对膀胱肿瘤EJ细胞的杀伤作用[J]. 东南大学学报(医学版) 2014(01)
- [9].苦参素对人膀胱癌EJ细胞抑制作用研究[J]. 医药导报 2008(05)
- [10].核电站建造用EJ标准的中外接轨关系问题探讨[J]. 中国核电 2008(01)
- [11].消痔灵注射液对膀胱癌EJ细胞生长抑制作用研究[J]. 中国中西医结合杂志 2020(11)
- [12].β-葡萄糖苷酶激活苦杏仁苷诱导膀胱癌EJ细胞凋亡的实验研究[J]. 现代泌尿外科杂志 2013(02)
- [13].姜黄素作用PTEN/PI3K/AKT通路诱导膀胱癌EJ细胞凋亡[J]. 中药药理与临床 2011(01)
- [14].紫杉醇诱导人膀胱癌EJ细胞凋亡及与Bcl-2基因表达的关系[J]. 实用癌症杂志 2011(02)
- [15].LY294002联合姜黄素对人膀胱癌EJ细胞的体外抑制作用[J]. 中国临床药理学杂志 2011(01)
- [16].苦豆碱对膀胱癌EJ细胞增殖与凋亡的影响[J]. 医学研究杂志 2017(06)
- [17].吡柔比星对膀胱癌EJ细胞增殖及Livin和Caspase-3表达的影响[J]. 医学研究生学报 2015(03)
- [18].人膀胱癌EJ细胞EZH2基因表达降低后基因表达谱的差异分析[J]. 基础医学与临床 2008(12)
- [19].穿膜肽促进三氧化二砷蛋白微球进入膀胱肿瘤EJ细胞的实验研究[J]. 中国新药杂志 2013(20)
- [20].EJⅡ-100型杠杆式力标准机控制系统改造设计[J]. 计测技术 2019(06)
- [21].建筑施工企业大宗材料集中采购模式探究——以广西建工集团EJ公司为例[J]. 中外企业家 2020(06)
- [22].辐射敏感性启动子调控CD基因表达联合~(125)Ⅰ照射对膀胱癌EJ细胞的杀伤作用[J]. 标记免疫分析与临床 2011(05)
- [23].人膀胱癌细胞株EJ中热休克蛋白70的热诱导表达及其意义[J]. 中国药物与临床 2015(10)
- [24].EJⅡ-1型静重式力标准机一种常见故障的分析与改进[J]. 计测技术 2016(04)
- [25].CPPs-BDI-1-载蟾酥白蛋白纳米微球三联体杀伤EJ人膀胱癌细胞实验研究[J]. 中国医刊 2014(11)
- [26].膀胱癌EJ细胞的CD44异常糖基化及其单抗KMP1的生物学功能研究[J]. 中国肿瘤临床 2011(13)
- [27].全硫代反义寡核苷酸抑制人膀胱癌Ej细胞活性的实验研究[J]. 右江医学 2008(02)
- [28].MicroRNA-497对人膀胱癌EJ细胞增殖和凋亡的影响[J]. 实用医学杂志 2017(20)
- [29].CPPs-BDI-1-载吡柔比星白蛋白纳米微球三联体杀伤EJ人膀胱癌细胞实验研究[J]. 齐齐哈尔医学院学报 2015(27)
- [30].斑蝥酸钠维生素B_6注射液诱导人膀胱癌EJ细胞凋亡实验观察[J]. 河北北方学院学报(自然科学版) 2013(03)