论文摘要
羟基红花黄色素A（hydroxysafflor yellow A,HSYA）是红花中的单体有效成分,近年来,对HSYA各方面药理活性进行了广泛研究,特别是抗脑缺血方面,HSYA显示了有效的抗脑缺血活性,其中涉及的机制包括抗血小板聚集,抗氧化自由基损伤,抗兴奋性氨基酸毒性等等,然而对其抗脑缺血后炎症的研究目前较少。前期,我们的基因芯片结果提示HSYA可能发挥调节炎症因子转录表达的作用,为了进一步深入阐明HSYA抗脑缺血的机制,本研究采用线栓法制备大鼠永久性脑缺血模型,首先比较不同HSYA给药方式,并最终选取以HSYA静脉注射半衰期为间隔连续多次给药这一最佳方案,观察HSYA对永久性脑缺血大鼠炎症信号转导途径核转录因子κB调节通路相关因子的作用。于缺血后3h,6h,12h,24h取大脑皮层:Westernblotting检测细胞核及胞浆核转录因子NF-κB p65及胞浆磷酸化IκB-α（pIκB-α）蛋白水平表达;Trans AM试剂盒检测NF-κB DNA结合活性;RT-PCR检测炎性因子TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-10转录水平表达。ELISA检测上述炎性因子的蛋白水平表达。同时,还将HSYA的作用强度与NF-κB抑制剂——二硫代氨基甲酸吡咯烷铵（Pyrrolidine dithiocarbamate ammonium salt,PDTC）做比较。最后,HPLC法进行了HSYA在缺血大鼠脑组织及血浆中的含量测定,并以核磁共振为研究手段进行了初步的HSYA抗脑缺血皮层脑组织的代谢组学研究。结果表明,大鼠脑缺血后连续多次静脉注射HSYA(10mg·kg-1),能够显著抑制NF-κB通路p65核转位以及IκB-α的磷酸化,降低NF-κB DNA结合活性,并降低促炎性因子TNF-α,IL-1β,IL-6 mRNA及蛋白水平的表达,升高抗炎因子IL-10 mRNA及蛋白表达水平,能够抑制缺血后脑组织毒性代谢产物乳酸及谷氨酸的含量,升高GABA及葡萄糖,提示HSYA的抗脑缺血作用可能与其抑制炎症信号途径中NF-κB激活及炎性因子表达,同时抑制内源毒性代谢物的产生,维持缺血后脑组织的能量代谢有关。