肺间充质干细胞及肺癌细胞系对T细胞的调节作用

论文摘要

肺癌细胞通过上调Fas配体（fas ligand, FasL）表达、借助FasL/Fas凋亡途径反杀伤Fas阳性肿瘤浸润淋巴细胞（tumor-infiltration lymphocyte,TIL）,主动逃避免疫监视,导致肿瘤局部抗肿瘤免疫下降。因此,FasL是新的具有发展前途的肺癌基因治疗靶位。肿瘤间质是肿瘤侵袭性生长的重要微环境,肿瘤细胞增殖性生长、转移病灶的组织重建需要间充质细胞的大量增殖。间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSC）作为间质细胞的前体细胞,可以靶向微小肿瘤迁移,追逐性浸润、分布于侵袭性生长的肿瘤边缘和瘤床内部,并增殖分化参与肿瘤间质形成。目前已在人骨髓、肝脏、脾脏、肌肉、脑、皮肤、脂肪等组织中证明有MSC存在,但对从肺脏来源的MSC的生物学性状研究尚少有报道。肺脏是否存在MSC?肺脏来源的MSC是否如同肺癌细胞一样对T淋巴细胞具有免疫抑制作用?肺MSC与肺癌的发生、发展和转移存在什么关系?通过遗传修饰调节肺癌细胞FasL基因表达,能否抑制肿瘤细胞的免疫反击能力?这些问题目前还知之甚少,对这些问题的回答将有助于进一步开展肺癌间质细胞和肺癌干细胞研究。我们针对上述问题以机体抗肿瘤免疫的主要效应细胞T淋巴细胞为研究对象,进行了一系列实验研究,实验内容和结果概括如下:1.胎肺间充质干细胞的分离培养及鉴定为证实人肺组织中存在MSC,本研究从自愿捐赠的15～22孕周流产胎儿取材,采用密度梯度离心法从胎肺中分离单个核细胞,低血清培养基培养和扩增胎肺贴壁细胞（fetal lung-derived adherent cell,FLAC）,进一步挑选独立的克隆分别培养,从贴壁细胞中纯化FLAC并运用荧光显微镜及流式细胞仪检测检测其一般生物学特性,包括细胞形态、免疫表型、细胞周期和生长曲线,通过定向诱导成脂肪、成骨和成软骨分化,RT-PCR检测特异性表达产物,从分子水平早期证实FLAC向目的细胞的转化以鉴定其多向分化潜能。结果表明FLAC符合干细胞特性,为胎肺间充质干细胞（fetal lung-derived mesenchymal stem cell, FLMSC）。2.胎肺间充质干细胞的免疫调节作用为确定胎肺MSC的免疫调节作用,应用3H-TdR掺入法分别观察了MSC对成人外周血淋巴细胞和脐血淋巴细胞增殖反应的影响。结果表明MSC对T淋巴细胞具有负性调

论文目录

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• 论文正文 肺间充质干细胞及肺癌细胞系对T 细胞的调节作用
• 前言
• 第一部分 胎肺间充质干细胞的分离培养及鉴定
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 小结
• 第二部分 胎肺间充质干细胞的免疫调节作用
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 小结
• 第三部分 RNA 干扰肺癌细胞H460 FasL 表达对T 细胞凋亡的影响
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 小结
• 全文结论
• 致谢
• 参考文献
• 文献综述 间充质干细胞的研究进展
• 参考文献
• 在读期间发表论文