脐血浆活性成分分析及其对脐血CD34+细胞增殖的影响

论文摘要

研究背景与目的目前已经有大量实验证实脐带血造血干细胞比骨髓中和外周血来源的动员的造血干细胞更具有自我更新、增殖分化和体外扩增潜能,广泛应用于干细胞移植以及其它临床治疗中。CD34+是造血干细胞的重要标志物,是最常用的分离造血干细胞的标志。CD34+造血干细胞在骨髓和脐带血中含量相对较高,具有较强的自我更新和分化能力。而脐血浆是脐血干细胞增殖的天然微环境,其中的活性成分已经引起广泛的关注,文献已有报道,脐血浆能显著促进血细胞克隆形成和细胞增殖,也发现其血浆中含有干细胞因子（SCF）和粒细胞集落刺激因子（GM-CSF）,但对脐血浆中活性蛋白成分的了解仍不全面。生物芯片是20世纪90年代初发展起来的一种全新的微量分析技术,目前常见分类主要是三大类：基因芯片、蛋白芯片、芯片实验室。蛋白芯片集高通量、高速度、高质量和自动化等特点于一身,这是目前使用的其他检测方法望尘莫及的。为对脐血浆中的活性蛋白成分有较全面的了解,本研究利用蛋白芯片技术,分析脐血浆中的活性成分,并观察其对CD34+造血干细胞的增殖分化的影响,为相关细胞生物学临床应用打下基础。方法本研究将采用蛋白芯片技术对脐血浆和健康青年女性静脉血浆活性成分进行对比分析,用Gene Pix Pro4.0软件进行人脐血浆和静脉血浆两个样本的蛋白含量差异性分析。用MiniMACS免疫磁珠从脐血中分选出CD34+细胞,在CD34+细胞培养液中中加入脐血浆,显微镜下观察并计数CD34+细胞增殖能力。统计学分析：采用SPSS10.0软件进行分析,t检验,P<0.05为有显著性差异。结果1脐血浆中有多种蛋白分子的含量显著高于静脉血浆,包括SCF,IL-20.IL-12、IL-3、FGF-4、BMP-2、BMP-7、IGF-l、IL-4、Frizzled-3、RAGE、CRIM-l、Neuritin、in-2、Neurturin、SFRP-3、Tomoregulin-1等等；2在CD34+细胞培养液中加入脐血浆能显著促进细胞增殖分化。结论脐血浆中存在多种活性蛋白成分,其含量显著高于静脉血浆,具有潜在的临床应用价值；其对CD34+造血干细胞的增殖分化有显著的促进作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 中英文缩略词对照表
• 1 研究背景与目的
• 2 实验材料
• 2.1 脐血来源
• 2.2 主要试剂
• 2.3 主要实验仪器及设备
• 2.4 主要试剂的制备
• 2.5 蛋白质芯片检测内容
• 3 实验方法
• 3.1 材料的收集
• 3.2 蛋白芯片实验步骤
• 3.2.1 蛋白定量
• 3.2.2 透析样本
• 3.2.3 生物素标记蛋白样本
• 3.2.4 干燥芯片
• 3.2.5 封闭和孵育抗体芯片
• 3.2.6 荧光检测
• +细胞的影响'>3.3 脐血浆对CD34⁺细胞的影响
• 3.3.1 分离脐血单个核细胞
• +细胞'>3.3.2 磁珠分选CD34⁺细胞
• +细胞的增殖'>3.3.3 CD34⁺细胞的增殖
• 3.4 图像采集和数据分析
• 4 结果
• 4.1 蛋白定量分析
• 4.2 蛋白成分分析
• 4.3 脐血浆促进CD34+细胞增殖和细胞集落形成
• 5 讨论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 个人简历、硕士学位学习期间发表文章
• 致谢