非小细胞肺癌患者尿中exosomes蛋白质组的差异表达分析

论文摘要

目的:尿是除血浆之外的另一种寻找潜在疾病生物标志物的重要生物材料,尿的非侵入式取样方式和收集样本量大的优点,使尿蛋白质组学（urinary proteomics）的研究日益增多。而exosome作为尿中的一种特别的小体,其组成成分和功能的研究可能对某些疾病的发生、诊断、预防和治疗有很大的意义,所以本研究分析了正常人和非小细胞肺癌患者尿中的exosomes差异蛋白质组,希望为非小细胞肺癌的预防、诊断和治疗提供潜在的生物标志物的候选分子。方法:本研究以200000×g超高速离心法分离正常人和非小细胞肺癌（NSCLC）患者尿的exosomes,运用1D SDS-PAGE对exosomes蛋白质组进行分组,然后运用分析软件Quantity One对正常人和非小细胞肺癌exosomes的蛋白质组进行筛选,选出差异蛋白质后,经过脱色、还原、烷基化、酶解后用HPLC-CHIP-MS/MS对蛋白质进行鉴定,所得的质谱数据进入UniProtKB/SWISS-PORT数据库,搜索得到相关蛋白质。结果:正常组和疾病组患者尿exosomes蛋白质组的差异主要出现在90kDa、66kDa和31kDa～20kDa条带。从电泳胶上切取正常组和疾病组的31kDa～20kDa条带做质谱分析,得到24种蛋白质,其中在NSCLC患者尿exosomes中发现了8种差异表达蛋白,包括免疫球蛋白κ的三个片段、两种Ras相关蛋白、谷胱甘肽S转移酶A2、血清淀粉样P成分前体和磷脂酰乙醇胺结合蛋白1。讨论:正常组和疾病组患者尿exosomes蛋白质组的差异主要出现在90kDa、66kDa和31kDa～20kDa条带。分子量约为90kDa的条带为Tamm-Horsfall蛋白（THP）;而由于血浆中大于60kDa的蛋白不可能通过肾小球滤过作用进入尿液,因此尿中出现的大于60kDa的蛋白应该是由肾脏上皮细胞所分泌的。因此,只有31kDa～20kDa的条带来源于血浆,所以选取此条带来做蛋白质质谱分析。在NSCLC患者尿exosomes中通过UniProtKB/SWISS-PORT数据库搜索鉴定了发现了8种差异表达蛋白,与免疫相关的免疫球蛋白κ的三个片段;两种Ras相关蛋白,Ras基因家族突变是人类肿瘤最常见的癌基因事件之一,并认为是肿瘤发生、发展中的一个共同通路;谷胱甘肽S转移酶A2,谷胱甘肽S转移酶表型的变化在多种肿瘤中都有发现;血清淀粉样P成分前体,已有研究发现血清淀粉样A成分可作为判断肺癌病理发展进程诊断指标;磷脂酰乙醇胺结合蛋白1（PEBP1）,PEBP为丝氨酸蛋白酶抑制剂,并在非小细胞肺癌细胞系A549细胞分泌的蛋白中发现,提示尿exosomes中的PEBP可能来源于肺癌组织,表明PEBP可能是NSCLC生物标志物的一种新的候选分子。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 样品的收集、处理和exosmes 的分离及形态学验证
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第二部分 非小细胞肺癌患者和正常人尿中exosomes 蛋白质组的差异表达分析
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 结论
• 4 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 论文简约英文版
• 文献综述
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的论文