两种探针DNA指纹图对小鼠遗传检测的比较研究

论文摘要

目的：探讨用人工合成的两种非放射性标记的寡聚核苷酸探针制作的DNA指纹图在近交系小鼠遗传检测中的应用，并通过比较，分析两种探针的可靠性和稳定性。为进一步完善DNA指纹技术，使其得到更加广泛的发展，并为近交系小鼠遗传检测方法的改进、建立标准的实验小鼠DNA指纹数据库用于不同地区实验室间的使用和参考提供重要信息。方法：采用人工合成的两种生物素标记的探针（GGAT）4、（GTG）5以及Southern杂交的方法制作BALB／c、C57BL／6J、DBA／2、C3H近交系小鼠的DNA指纹图，对这4个品系的小鼠进行遗传检测。通过分析品系内小鼠和不同品系小鼠DNA指纹图的平均图带数、图带大小、平均相似系数（（?））、平均等位基因频率（（?））、各品系的品系特异性带数（S）及在不同探针下所占百分比（S／T）、相同DNA指纹图的概率（P）等，比较两种探针的重复性和优越性。结果：在所检测的4个近交系小鼠的品系中，两种探针都表现出品系内个体DNA指纹图谱的带型基本一致，不同品系间带型差别明显。用不同的探针得到的指纹图是完全不一样的。两种探针对BALB／c、C57BL／6J、DBA／2、C3H 4种近交系小鼠产生的DNA指纹图的平均图带数均为8～12条，且大部分分布在2kb以上，具有良好的多态性。品系内平均DNA指纹图相似系数在0.92～1.00的范围内，具有相同指纹图的概率均在3.1×10-1以上，极显著地高于品系间的相似系数和相同指纹图的概率(（?）=0.22～0.39，P＜1.07×10-4)。另外，（GTG）5探针得到的品系特异性带数百分比略高于（GGAT）4探针。结论：用非放射性标记的人工合成的寡聚核苷酸探针（GCAT）4以及（GTG）5所得到的DNA指纹图遗传变异灵敏度高，稳定性好，探针来源容易，杂交时间短，操作简便，并可检测出个体或品系间的遗传距离，同时非放射性标记技术可避免放射性同位素的污染。试验还发现（GTG）5探针的重复性和稳定性比（GGAT）4探针较好，并且用两种不同的探针进行DNA指纹分析，可以检出基因组中更多的个体特异性信息，结果更加可靠。因此这两种探针在近交系小鼠的遗传质量检测中有广阔的应用前景，并可推广到其他实验动物的遗传检测及临床医学和法医学的应用中。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 1.近交系小鼠
• 2.近交系小鼠的遗传检测
• 3.DNA指纹技术
• 4.指纹技术中的探针
• 材料和方法
• 1.实验材料
• 2.实验方法
• 结果
• 1.寡聚核苷酸探针产生的小鼠DNA指纹图
• 2.品系内指纹图的变异性
• 3.品系间的变异性
• 4.两种探针的特异性与稳定性
• 讨论
• 1.指纹图的基本原理——DNA多态性
• 2.寡聚核苷酸探针及非放射性标记的应用
• 3.BALB/c、C57BL/6J、DBA/2、C3H近交系小鼠
• 4.DNA指纹图存在的问题及发展方向
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文目录
• 附录
• 1.缩写词表
• 2.实验动物合格证
• 致谢