人参皂苷Rb1对大鼠IL-1β和TNF-α表达及睡眠脑电影响的研究

论文摘要

人参皂苷Rb1（Ginsenoside Rb1,GsRb1）是人参皂苷的一种有效成分,可以显著提高机体免疫功能,对于中枢神经系统也可以表现为抑制作用。IL-1β和TNF-α是两种在睡眠的免疫调节中发挥重要作用的细胞因子,能够改善睡眠,主要表现为促进慢波睡眠（slow wave sleep,SWS）。人参皂苷Rb1影响中枢神经系统细胞因子的表达及其对睡眠结构的改变之间的关系,至今尚缺乏研究。在本研究课题中,我们利用RT-PCR和免疫组化技术检测注射不同剂量人参皂苷Rb1的实验大鼠海马和下丘脑中细胞因子IL-1β和TNF-α的表达情况。同时对注射不同剂量人参皂苷Rb1的实验大鼠的皮层脑电图（ECoG）中的慢波睡眠（SWS）进行分析,从而探索细胞因子IL-1β和TNF-α在人参皂苷Rb1改善睡眠结构的可能作用。RT-PCR结果显示,与对照组相比,中剂量组（40 mg/kg）和高剂量（80 mg/kg）人参皂苷Rb1能够显著增加海马IL-1βmRNA的表达（P<0.01）,中剂量组（40 mg/kg）人参皂苷Rb1能够显著增加下丘脑IL-1βmRNA的表达（P<0.0 5）;TNF-αmRNA的表达仅在下丘脑且在高剂量（80 mg/kg）的作用下表达明显增加（P<0.05）;而免疫组化结果则显示,各剂量组（20,40,80 mg/kg）IL-1β和TNF-α蛋白表达均有显著差异（P<0.01）,且呈剂量递增。对不同剂量组实验大鼠ECoG慢波睡眠时间和慢波功率谱的分析表明,不同剂组人参皂苷Rb1均能够增加大鼠慢波睡眠（SWS）所占总睡眠时间（TST）的比例。低剂量（20 mg/kg）和中剂量（40 mg/kg）人参皂苷Rb1能够增加δ波和α波的功率值,且效果显著,而中剂量（40 mg/kg）能够显著增加θ波的功率值,β波除了被低剂量（20 mg/kg）增加外,功率值一直处于比较低的水平。本研究对人参皂苷Rb1影响睡眠模式及其可能的机制做了初步的探索,实验观察到免疫调节中药组分人参皂苷Rb1可调节大鼠海马、下丘脑IL-1β和TNF-α的表达,改变睡眠结构及脑电功率谱,提示人参皂苷Rb1改变睡眠状况可能部分是通过调节中枢神经系统炎性细胞因子的产生实现的。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 引言
• 1.1 人参皂苷及其有效组分的研究概况
• 1.2 睡眠机制研究概述
• 1.3 睡眠与细胞因子
• 1.4 本研究的思路
• 第二章 人参皂苷 Rb1 对大鼠海马和下丘脑 IL-1β 和 TNF-α mRNA 表达的影响
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验器材
• 2.1.2 实验试剂
• 2.1.3 实验动物
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 大鼠给药及脑组织的获取
• 2.2.2 海马及下丘脑总RNA 提取
• 2.2.3 去除总RNA 中的DNA 污染
• 2.2.4 总RNA 的检测
• 2.2.5 逆转录反应体系的建立
• 2.2.6 PCR 反应体系的建立
• 2.2.7 琼脂糖凝胶电泳
• 2.2.8 凝胶图像采集及分析
• 2.2.9 统计学分析
• 2.3 实验结果与分析
• 2.3.1 总RNA 的检测结果
• 2.3.2 半定量RT-PCR 检测
• 2.3.2.1 IL-1βmRNA 的表达
• 2.3.2.2 TNF-αmRNA 的表达
• 第三章 人参皂苷 Rb1 对大鼠海马和下丘脑 IL-1β 和 TNF-α 蛋白表达的影响
• 3.1 实验材料
• 3.1.1 实验器材
• 3.1.2 实验试剂
• 3.1.3 实验动物
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 大鼠给药、取材及组织前期处理
• 3.2.2 石蜡切片的制作
• 3.2.3 组织切片HE 染色
• 3.2.4 免疫组化染色（SABC 法）
• 3.2.5 图像采集及分析
• 3.2.6 统计学分析
• 3.3 实验结果与分析
• 3.3.1 HE 染色形态学结果
• 3.3.2 不同时间点 IL-1β和 TNF-α蛋白表达结果
• 3.3.3 不同剂量组 IL-1β和 TNF-α蛋白表达结果
• 第四章 人参皂苷 Rb1 对大鼠皮层脑电的影响
• 4.1 实验材料
• 4.1.1 实验器材
• 4.1.2 实验试剂
• 4.1.3 实验动物
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 外科手术和电极植入
• 4.2.2 大鼠给药
• 4.2.3 大鼠脑电信号的采集与预处理
• 4.2.4 脑电数据分析
• 4.3 实验结果与分析
• 4.3.1 脑电数据采集结果
• 4.3.2 脑电数据分析结果与分析
• 第五章 讨论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士期间的研究成果