17β-雌二醇对应力后盆腔脏器脱垂患者阴道壁成纤维细胞变化的影响

论文摘要

目的：研究体外培养的盆腔脏器脱垂（pelvic organ prolapse, POP）患者阴道壁成纤维细胞在应力后Ⅰ型胶原（collagenⅠ，ColⅠ）、Ⅲ型胶原（collagen Ⅲ， Col Ⅲ）、基质金属蛋白酶-1（matrixmetalloproteinase-1,MMP-1）及组织基质金属蛋白酶抑制物（tissueinhibitor of metalloproteinase,TIMP）基因表达的变化，以及17β-雌二醇对受力后阴道壁成纤维细胞的生物化学改变的影响，从细胞水平探讨雌激素在POP中的治疗作用。方法：1.研究对象：选取2009.10-2010.5期间在河北医科大学第二医院因POP接受手术治疗的患者为实验对象，留取术中取下的阴道壁组织作为实验标本。入选者均为绝经后妇女，平均年龄为（58.3±9.6）岁，平均产次为（2.9±1.2）次，体重指数为（23.78±1.90）kg/m2。所有患者依据POP-Q（pelvic organ prolapse quantitation）进行评分分期，至少有一个部位符合Ⅲ-Ⅳ度脱垂。所有入选者术前3个月没有使用过雌激素类药物，且均无合并压力性尿失禁（stress urinary incontinence, SUI）,无类风湿性关节炎、肺气肿、甲状腺功能亢进等影响胶原纤维代谢的疾病。标本的留取事先均征得入选患者的知情同意，并签署知情同意书。2.阴道壁成纤维细胞的体外培养：采用组织块培养法进行原代培养，细胞免疫组化染色法鉴定为成纤维细胞后，绘制细胞生长曲线，选取3-5代对数生长期的成纤维细胞进行实验。3.加载机械力以及雌激素干预：将成纤维细胞接种于Flexcell4000柔性基底拉伸系统的BioFlex培养板中加载10%，0.3Hz的周期性机械拉伸12小时，以静态培养的细胞为对照组；卸载力后，加入以无水乙醇为溶媒新鲜配制的17β-雌二醇，使药物终浓度为10-8mol/L，设置空白对照组以及含有相同溶媒含量的溶媒对照组，继续培养48小时。4.反转录聚合酶链反应（RT-PCR）：Trizol法分别提取卸载力后及雌激素干预后的细胞内总RNA，逆转录为cDNA，并进行目的基因的扩增和电泳，检测各目的基因的表达量。结果资料均采用均数土标准差（x士s）表示，采用SPSS13.0统计软件进行统计学处理，以p<0.05认为差异有统计学意义。结果：1.阴道壁组织块培养出的细胞较大，贴壁生长，呈梭形或多角形，边界清楚。细胞免疫组化鉴定波形蛋白表达阳性，角蛋白和平滑肌肌动蛋白表达阴性，证明为成纤维细胞。细胞在第1-4天生长较缓慢，为潜伏期；在第4-7天细胞增殖活跃，呈对数期生长；到第7-8天，细胞增殖又趋于平缓，接近于停滞期。2.加载机械力之前，成纤维细胞为梭形或多角形，边界清楚，可见一个或多个核仁，排列呈多向性，无明显规律；卸载力后，细胞变得狭长，呈长梭形，排列趋于规则，垂直于培养板周围的应变场。3.与静态对照组相比较，应力组ColⅠ、MMP-1的表达量增加，而ColⅢ、TIMP-1的表达量减少，各目的基因的p值均＜0.05，均有统计学意义;与溶媒对照组相比较，17β-雌二醇降低MMP-1基因的表达量，而促进ColⅠ、Col Ⅲ、TIMP-1基因的表达，p值均＜0.05，差异均有显著性。结论：1.机械拉伸使阴道壁成纤维细胞发生重排，以适应力学环境的改变，继而引起细胞外基质成分的改变，破坏了原先的力学平衡状态，这也许是POP的发生机制之一。2.17β-雌二醇一定程度上可以逆转细胞在持续机械拉伸刺激后的生物学变化。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 盆腔脏器脱垂与阴道壁结缔组织的改变
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历