MMP-2和TIMP-2基因启动子区多态性与卵巢上皮性癌关系的研究

论文摘要

目的:卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤,由于发病隐匿,进展迅速,缺乏有效的早期诊断方法,70%～80%的患者发现时已为晚期,5年生存率仍徘徊在25%～30%。目前卵巢癌的病因尚不清楚,但研究发现,约10%的卵巢恶性肿瘤患者具有遗传异常,因此,寻找易感基因,确立高危人群,实现早期诊断是提高卵巢癌生存率的有效途径。基质金属蛋白酶因其在肿瘤发生发展中的重要作用,已被作为一组重要的遗传候选基因,近年来成为研究的热点。基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMPs）是降解细胞外基质成分的一类重要的Zn2+依赖性蛋白水解酶,组织金属蛋白酶抑制剂（tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMPs）是其天然抑制物,二者的表达失衡在肿瘤发生和侵袭转移过程中起着十分重要的作用。其中明胶酶MMP-2和其特异性抑制因子TIMP-2与肿瘤的关系倍受关注。随着分子生物学的发展,发现在MMP-2和TIMP-2基因启动子区有一些多态性位点,可以影响基因的转录水平和蛋白质表达,进而与某些肿瘤的发病相关。本研究旨在探讨MMP-2和TIMP-2基因启动子区单核苷酸多态性（SNPs）与卵巢上皮性癌发病风险的关系,从分子水平为卵巢癌的预防和诊治提供依据。方法:采用基于医院的病例-对照研究方法,以246例卵巢癌患者和324例健康对照妇女为研究对象,采集外周静脉血5 ml,以蛋白酶K消化-饱和氯化钠盐析法提取基因组DNA,聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism ,PCR-RFLP）方法对MMP-2基因启动子区C-1306T、C-735T和TIMP-2基因启动子区G-418C 3个SNPs位点进行基因分型。数据统计分析采用SPSS11.5版软件包（SPSS Company, Chicago,Illinois,USA）进行处理。正常对照组基因型频率分布行χ2检验做Hardy-Weinberg平衡分析。病例组与对照组的年龄、初潮年龄差异采用t检验,孕次、产次差异比较采用χ2检验。基因型和等位基因频率分布比较采用χ2检验,以非条件logistic回归方法计算表示相对风险度的比值比（odds ratio,OR）及其95%可信区间（confidence interval,CI）。采用EH软件分析MMP-2 C-1306T和C-735T基因单体型频率,2ld软件分析连锁不平衡状态。采用似然比检验（likelihood ratio test）分析MMP-2和TIMP-2基因之间的交互作用。P<0.05作为差异有显著性的标准。结果1对照组MMP-2 C-1306T、C-735T SNPs位点和TIMP-2 G-418C SNP位点的基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡（P=0.87,P=0.75和P=0.81）。2 MMP-2 C-1306T多态的基因型和等位基因频率在卵巢癌组和对照组中分布无显著性差异（P=0.42和P=0.55）。与T/T+C/T基因型比较,C/C基因型可能与卵巢癌的发病风险无关,OR值为1.07（95%CI=0.72～1.58）。以病理类型、临床分期或确诊时年龄分层分析,MMP-2 C-1306T多态的基因型频率在各组间分布也均未发现显著性差异（P值均大于0.05）。3 MMP-2 C-735T多态3种基因型频率（C/C、C/T、T/T）在卵巢癌组和对照组中分别是66.7%、28.0%、5.3%和55.9%、39.2%、4.9%,两组比较有显著性差异（P=0.02）;卵巢癌组的C等位基因频率（80.7%）明显高于对照组（75.5%）,两组比较有统计学意义（P=0.04）。与T/T+C/T基因型比较,携带C/C基因型可显著增加卵巢癌的发病风险,OR值为1.58（95%CI=1.12～2.23）。以病理类型分层分析发现,C/C基因型与宫内膜样癌的发病风险明显相关（ OR=1.69 ,95%CI=1.03～2.79）,且有增加浆液性癌发病风险的趋势（OR=1.58,95%CI=0.97～2.56）;以临床分期分层分析显示,C/C基因型与早期卵巢癌的发病风险明显相关（OR=1.88,95%CI=1.11～3.17）,有增加晚期卵巢癌发病风险的趋势（OR=1.46,95%CI=0.99～2.15）;以年龄分层分析显示,携带C/C基因型明显增加年龄≥50岁妇女患卵巢癌的风险,OR值为1.71（95%CI=1.14～2.57）。4 TIMP-2 G-418C多态的基因型和等位基因频率在卵巢癌组与对照组中分布无显著性差异（P=0.47和P=0.33）,与C/C+G/C基因型相比,G/G基因型可能与卵巢癌的发病风险无关（OR=1.13,95%CI=0.80～1.62）。但进一步分层分析发现,携带G/G基因型有增加宫内膜样癌发病风险的趋势,OR值为1.62（95%CI=0.94～2.78）,而与临床分期及发病年龄无显著关联。5对MMP-2 C-1306T和C-735T两位点SNPs进行联合分析显示,C-1306-C-735单体型正常对照组中最常见的,占65.7%,但4种单体型（T-1306-T-735、T-1306-C-735、C-1306-T-735和C-1306-C-735）频率在卵巢癌组与对照组中分布无显著性差异（P=0.24）。另外发现,MMP-2 -1306C等位基因和-735C等位基因存在连锁不平衡现象（D’=0.78,P=0.00）。6采用似然比检验分析TIMP-2 G-418C SNP与MMP-2 C-1306T、C-735T 2个SNPs之间的基因-基因交互作用。结果显示,TIMP-2 G-418C与MMP-2 C-1306T或TIMP-2 G-418C与MMP-2 C-735T之间无明显交互作用存在（P=0.74和P=0.41）。但对不同基因型组合分析显示,卵巢癌组的C/CMMP-2 C-735T-G/GTIMP-2 G-418C频率（46.3%）明显高于对照组（36.4%）,差异有显著性（P=0.02）,且携带C/CMMP-2 C-735T- G/GTIMP-2 G-418C基因型个体的卵巢癌发病风险是携带C/T+T/TMMP-2 C-735T-G/GTIMP-2 G-418C基因型的1.67倍（95%CI= 1.10～2.54）。结论1 MMP-2 C-1306T的基因多态性可能与上皮性卵巢癌遗传易感性无关。2携带MMP-2 -735C/C基因型可能显著增加卵巢癌的发病风险,并与卵巢癌的病理类型、临床分期及年龄有显著关联,因此,该基因型可能为卵巢上皮性癌发病的潜在危险因素。3 MMP-2 C-1306T和C-735T多态间存在连锁不平衡现象,但4种单体型与卵巢癌的发病风险无显著关联。4 TIMP-2 G-418C单核苷酸多态性可能与不同病理类型的卵巢上皮性癌发病风险有关。5 TIMP-2 G-418C SNP与MMP-2 C-1306T、C-735T 2个SNPs之间,虽然未发现有明显交互作用存在,但同时携带具有强启动子活性的MMP-2 -735C/C和TIMP-2 -418G/G基因型,可以显著增加卵巢癌发病风险,可能有一定的累加效应。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 MMP-2 和TIMP-2 基因启动子区多态性与卵巢上皮性癌关系的研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 基质金属蛋白酶及其组织抑制因子与卵巢癌关系的研究进展
• 致谢
• 个人简历