论文摘要
本试验以原代培养的28日龄断奶仔猪小肠上皮细胞为研究模型,研究胰高血糖素样肽-2（GLP-2）对断奶仔猪肠上皮细胞增殖及其功能的影响。研究共包括两个试验:试验一、28日龄断奶仔猪肠道上皮细胞的原代培养及生长规律;试验二、胰高血糖素样肽-2对28日龄断奶仔猪肠道上皮细胞增殖和功能的影响。试验一共设6个处理（1-1、1-2、1-3、1-4、1-5、1-6）,每个处理设8个重复,每个重复1孔,在37℃,5%CO2条件下培养144小时,在培养的第48h、72h、96h、120h、144h和168h分别测定细胞的MTT OD值,同时用倒置显微镜观察细胞数量和形态,并摄影记录。结果表明:28日龄断奶仔猪小肠上皮细胞体外接种48h贴壁生长,在细胞接种的48h至72h,细胞大量增殖,在72h至96h,细胞增殖减缓,到96h时达到最大值,在接种120-168h,细胞增殖减少和凋亡增加,细胞数量逐渐减少。试验结果表明:要确定某一物质对断奶仔猪IEC的作用和其它定量测试最佳时间应该在细胞接种的48-96h。试验二共设6个处理（2-1、2-2、2-3、2-4、2-5、2-6）,每个处理设16个重复,每个重复1孔,在37℃,5%CO2条件下培养48h后分别换为含GLP-2浓度为0、10-11、10-10、10-9、10-8和10-7mol/l的培养液,继续培养48h,收集培养液上清和细胞裂解液进行指标测定,并分别在接种后48、72、和95h利用倒置显微镜观察细胞的形态和生长情况。结果如下:在细胞培养液中加入GLP-2处理48h,各处理组细胞数量显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）多于对照组,MTT OD值均极显著高于对照组（P＜0.01）。各处理组培养液乳酸含量、总蛋白含量、蛋白沉积量和Na+,K+-ATP酶活力都显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）高于对照组。此外,各处理组胞外碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶和肌酸激酶活力均极显著低于对照组（P＜0.01）。综上试验结果表明,GLP-2可以促进断奶仔猪小肠上皮细胞的增殖,增加断奶仔猪小肠上皮细胞蛋白沉积,减轻断奶仔猪小肠上皮细胞受损伤的程度,维持细胞膜结构和功能的完整性,其作用效果与GLP-2浓度存在剂量依赖效应,这种剂量依赖效应具有明显的阶段性,GLP-2作用于断奶仔猪小肠上皮细胞的最佳浓度范围可能在1×10-9与1×10-7mol/l之间。