过敏性紫癜免疫发病机制的探讨

论文摘要

目的：探讨Toll样受体（TLRs）信号途径异常活化及CD4+T细胞亚群[Th1、Th2、CD4+CD25+Foxp3hish调节性T细胞（Treg）、Th17细胞]在过敏性紫癜（HSP）患儿免疫发病机制中的可能作用。方法：第一部分：采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及荧光定量PCR检测外周血单个核细胞TLRs （1-10）及信号途径分子MyD88、TRAF6、TRIF,细胞因子/趋化因子干扰素（IFN）-α、IFN-β、白细胞介素（IL）-6、IL-1β肿瘤坏死因子（TNF）-α、干扰素诱导蛋白（IP）-10、活化正常T细胞表达和分泌的调节因子（RENTES）、诱导性一氧化氮合酶（iNOS）及Blys/April mRNA的表达；应用酶联免疫吸附方法（ELISA）检测Blys、IFN-α、IFN-β、IL-6、IL-1β、TNF-a血浆水平；采用t检验比较2组间差异。第二部分：用流式细胞术检测外周血Th1、Th2、Treg及Th17细胞比例；用荧光定量PCR （Real-time PCR）检测Th1、Th2、Treg、Th17细胞转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3、ROR-γt及细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-13、TGF-β、CTLA-4、GITR、IL-10、IL-17A、IL-21等mRNA表达；应用酶联免疫吸附方法（ELISA）检测IFN-γ、IL-12、IL-4、TGF-β、IL-17A、IL-6血浆水平；采用t检验比较2组间差异。结果：1、TLR受体信号途径异常活化与HSP患儿免疫发病机制的关系：（1）HSP患儿TLR1、TLR2、TLR6、TLR5、TLR3、TLR7、TLR9 mRNA表达高十正常同年龄对照组（p<0.05）, TLR4较健康对照组差异无统计学意义（p>0.05）; （2） TLRs信号途径相关分子MyD88（2.47±1.06）与（0.73±0.22）、TRAF6 （2.54±0.72）×10-3与（0.70±0.20）×10-3、TRIF（3.18±0.86）×10-3与（0.93±0.35）×10-3较健康对照组明显升高（p<0.05）；（3）IFN-α、IFN-βmRNA及蛋白表达明显高于健康对照组（p<0.05）；（4）细胞因子/趋化因子IL-6、IL-1β、IP-10、RENTES、iNOS表达高于健康对照组（p<0.05）, TNF-a表达较健康对照组差异无统计学意义（p>0.05）；（5）HSP患儿Blys/April表达明显升高（p<0.05）。2、HSP患儿CD4+T细胞亚群变化：（1）流式细胞术检测发现,HSP患儿Th2细胞及Th17细胞明显升高（p<0.05）,Th1和Treg细胞比例与健康对照组差异无统计学意义（p>0.05）;（2） Real-time PCR进一步证实Th2、Th17细胞转录因子及细胞因子GATA-3、ROR-γt、IL-4、IL-5、IL-13、IL-17A、IL-17F、IL-21较健康对照组明显升高（p<0.05）；Th1、Treg细胞转录因子及细胞因子T-bet、IFN-γ、Foxp3、TGF-P、CTLA-4、GITR、IL-10较健康对照组差异无统计学意义（p>0.05）；（3）HSP患儿外周血IL-17A浓度明显升高（p<0.05）,进一步提示HSP患儿Th17细胞过度活化。（4）探讨HSP患儿影响CD4+T细胞亚群分化的外周血细胞因子微环境改变,注意到HSP患儿外周血外周血IL-4、IL-6浓度明显升高（p<0.05）, IFN-y、IL-12、TGF-p浓度无明显改变（p>0.05）。结论：1、HSP患儿TLR1、TLR2、TLR6、TLR5、TLR3、TLR7、TLR9及其信号途径相关分子MyD88、TRAF6、TRIF明显升高,提示各种病原微生物触发TLRs过度活化可能是导致HSP免疫功能紊乱的始动因素之一,TLRs过表达所致的炎症细胞因子/趋化因子或Blys/April异常产生可能参与HSP免疫发病机制。2、本文系统观察到HSP患儿CD4+T细胞亚群明显失衡,Th2及Th17过表达可能与抗体异常产生及血管炎的发生发展有关；HSP外周血细胞因子微环境变化是导致CD4+T细胞亚群紊乱的主要原因。

论文目录

• 英文缩略语
• 摘要
• Abstract
• 第一部分
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附表
• 第二部分
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附图表
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 附录