2007年江苏地区猪高热病病例中PCV2、PPV、PRV、PRRSV、CSFV、JEV、EMCV、PEV、PTV的检测和区分猪瘟野毒、疫苗毒荧光定量RT-PCR方法的尝试

论文摘要

根据GenBank中已发表的序列,设计针对猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV） Nsp2基因和猪瘟病毒（classical swine fever virus,CSFV） 5’-NCR的特异性引物,建立针对上述两种RNA病毒的多重RT-PCR方法,可同时扩增出相应的743 bp和288 bp的目的片段,并且针对猪繁殖与呼吸综合征病毒的引物能够区分PRRSV是否为缺失株,若为缺失株,扩增片段小于743 bp。实验结果表明此多重RT-PCR方法特异、敏感、快速,具有广阔的应用前景。同时根据GenBank中已发表的序列,设计了针对脑心肌炎病毒（encephalomyocarditis virus,EMCV）和日本乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）的保守区域的特异性引物,分别扩增出284 bp和1057 bp的目的片段。参照有关文献,采用nRT-PCR的方法检测猪肠病毒（porcine enterovirus,PEV）和猪捷申病毒（porcine teschovirus,PTV）,根据GenBank中已发表的PEV和PTV的血清型序列,针对猪捷申病毒PTV-1～PTV11、猪肠病毒PEVB的5’-NTR或肠病毒PEVA的3D聚合酶基因,采用三套引物,通过nRT-PCR的方法能够检出所有PEV和PTV的血清型的病毒,扩增的片段分别为158bp、221bp和313bp。实验结果表明上述PCR方法特异、敏感、快速,具有广阔的应用前景。应用上述PCR方法以及本实验室已经建立的检测猪圆环病毒2型（porcine cirvovirus type 2,PCV2）、猪细小病毒（porcine parvovirus,PPV）和猪伪狂犬病病毒（porcine pseudorabies virus,PRV）的多重PCR方法,对来自江苏地区的141份猪高热病病料进行检测,结果显示61份病料为PCV2阳性,阳性率为43.3%; 96份病料为PRRSV阳性,阳性率为68.1%; 69份病料为CSFV阳性,阳性率为48.9%;67份病料为PTV阳性,阳性率为47.5%; 34份病料为PEVB阳性,阳性率为24.1%;9份病料为EMCV阳性,阳性率为6.4%;PPV、PRV、JEV、PEVA均未为检出;其中PCV2、PRRSV混合感染阳性率最高,141份病料中有52份,占总数的36.9%,且有12份为PRRSV、PCV2和CSFV的三重混合感染,占总数的8.5%,同时,PCV2、PRRSV、PTV的混合感染有8份,占总数的5.7%;在混合感染病例中,PRRSV和CSFV混合感染居第二,141份病料中有41份,占总数的29%,PRRSV和PTV的混合感染为第三,141份病料中有35份,占总数的24.8%。猪瘟是一种传染性强、致病性高、危害最为严重的猪烈性传染病之一,本次调查中CSFV的阳性率高达48.9%,其对猪高热病的协同致病作用显而易见。综合本次调查结果,在猪高热病病原尚未明确的情况下,老的传染病并未得到有效控制,如猪瘟;新的传染病不断被检测出来,如PRRS和圆环病毒感染相关疾病（porcine cirvovirus disease,PCVD）。值得注意的是,猪捷申病毒和猪肠病毒感染,在我国猪群中的流行病学研究罕见报道,对2007年猪高热病病例中两病的流行病学调查结果表明,PTV的阳性率占47.5%,PEVB阳性率占36.9%,流行情况是严重的。上述检测结果足以说明我国猪高热病的复杂性及防治的艰巨性。本研究试图摸索一种复合荧光定量RT-PCR方法,用于CSFV野毒株与兔化弱毒疫苗株的鉴别诊断。通过对GenBank中公布CSFV野毒和弱毒疫苗株基因组序列的比较分析,在其5’端非编码区设计了一对针对CSFV的通用引物和两条分别针对CSFV野毒株和兔化弱毒疫苗株的特异性TaqMan探针,希望建立一种能区分CSFV野毒株和兔化弱毒疫苗株的敏感、特异、重复性好的复合荧光定量RT-PCR鉴别诊断方法,但所建立的方法并不能区分CSFV野毒和疫苗株的感染,这方面的工作还需继续努力。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 前言
• 1 猪繁殖与呼吸综合征病毒
• 2 猪瘟病毒
• 3 猪圆环病毒
• 4 猪细小病毒
• 5 猪伪狂犬病病毒
• 6 日本乙型脑炎病毒
• 7 脑心肌炎病毒
• 8 猪肠病毒
• 论文研究一、检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒多重RT-PCR 方法的建立
• 1、材料与方法
• 2、结果
• 3、讨论
• 论文研究二、检测日本乙型脑炎病毒和脑心肌炎病毒的RT-PCR 方法的建立
• 1、材料与方法
• 2、结果
• 3、讨论
• 论文研究三、检测猪捷申病毒和猪肠病毒的nRT-PCR 方法
• 1、材料与方法
• 2、结果
• 3、讨论
• 论文研究四、2007 年江苏地区猪高热病病例中9 种猪病病毒的流行病学调查
• 1、材料与方法
• 2、结果
• 3、讨论
• 论文研究五、区分猪瘟野毒株与兔化弱毒疫苗株的荧光定量RT-PCR 方法的尝试
• 1、材料
• 2、方法
• 3、结果
• 4、讨论
• 参考文献
• 全文小结
• 致谢