论文摘要
目的探讨准分子激光手术后大鼠角膜的Ⅰ型前胶原变化情况,比较角膜非手术区、手术野透明区与haze区的Ⅰ型前胶原含量的差异,并做出时间含量曲线,对haze区的面积和程度与前胶原的含量做相关分析,为进一步研究其分泌、外环境及加工的酶含量和活性变化提供有力的理论支持。方法首先建立大鼠PRK手术模型,术后每日用裂隙灯显微镜观察大鼠角膜haze的形成,并以Seiler [1]5级分类标准分级。于术前、术后第1天、3天、7天、15天、1月、2月、3月处死大鼠,取出眼球并立即在裂隙灯显微镜下用针刺标记出haze的范围,随即O将角膜取出,固定于标本保存液中。用HE染色法对胶原进行染色并在光镜下观察胶原结构形态。用鼠抗羊Ⅰ型前胶原的抗体结合SABC法检测与定位角膜Ⅰ型前胶原,光镜下观察其分布及量的变化,并用图像分析软件于不同的时间采集角膜非手术区、手术野透明区与haze区中Ⅰ型前胶原染色的光密度值,利用平均光密度值对它们之间Ⅰ型前胶原含量进行定量分析。结果我们观察到角膜的haze于术后15天开始出现,于术后2个月其分级达到最高,其分级与Ⅰ型前胶原含量有明显的相关性(r=0.406,p<0.05),此后减弱有所消退,但不随Ⅰ型前胶原的含量下降而下降(r=0.231,p>0.05);HE染色显示手术后15天角膜细胞发生明显的变化,出现了空泡,角膜基质的胶原纤维排列紊乱,极不规则,于haze标记处更为明显。用鼠抗羊Ⅰ型前胶原的抗体结合SABC法检测与定位角膜Ⅰ型前胶原,光镜下表现为Ⅰ型前胶原主要出现于细胞外基质中,细胞内未检测到明显的分布,正常角膜与手术区角膜中均有分布,但正常角膜中含量恒定,随时间延长其颜色逐步加深,特别在haze区,其染色与周围有明显的差异。用图像分析软件检测角膜Ⅰ型前胶原的光密度值表明,非手术区角膜平均光密度值各时间段内的Ⅰ型前胶原的含量均无明显变化(p>0.05);手术区角膜中的Ⅰ型前胶原含量于术后第三天开始显著增加(p<0.05),随时间延长而含量逐步升高,于手术后两个月达到最高峰,3个月时Ⅰ型前胶原的含量明显下降但仍高于手术前及术后第一天(p<0.05)。术后第15天、1月、2月、3月,haze区Ⅰ型前胶原的含量明显高于非haze区(p<0.05),手术区较非手术区Ⅰ型前胶原的含量显著增多说明Ⅰ型前胶原参与了角膜的损伤修复过程,其含量随修复的进行而不断增加,在修复完成后,其含量开始下降;在haze区较非haze的显著增加且与haze形成程度有明显相关性表明,Ⅰ型前胶原的异常增多是haze形成的重要原因,可能是导致的角膜胶原结构排列的紊乱,haze形成最主要的原因。结论1、Ⅰ型前胶原的含量增加可能是haze形成的主要因素之一。2、Ⅰ型前胶原的加工障碍致异常胶原形成可能是haze中胶原结构紊乱的主要原因之一。3、准分子激光手术后角膜的前胶原含量增加,为进一步研究其分泌、外环境及加工的酶含量和活性变化提供有力的理论支持。