高嘌呤饮食及罗格列酮干预对OLETF大鼠血尿酸水平的影响及其机制的研究

论文摘要

目的研究高嘌呤饮食及罗格列酮干预对OLETF大鼠血尿酸水平及肾小管上皮细胞有机阴离子转运体1（organic anion transporter 1,OAT1）、尿酸盐转运子（uratetransporter,UAT）基因表达的影响。方法30只4周龄雄性OLETF大鼠普通饮食喂养至第25周龄时,随机分为对照组和高嘌呤饮食组,其中对照组10只、高嘌呤饮食组20只。高嘌呤饮食组给予10%高酵母饲料喂养,同时给予腺嘌呤溶液灌胃（50mg/kg/d）,对照组给予普通饮食,同时每日给予同体积蒸馏水灌胃。同系4周龄雄性LETO大鼠30只,作为OLETF大鼠的实验对照组,其分组及处理方法同上。监测大鼠血尿酸（SUA）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、肌酐（CRE）、尿素氮（BUN）、24小时尿量及尿尿酸（UUA）,放免法测定血胰岛素水平,比较两种大鼠高尿酸血症的发病情况。待OLETF大鼠高嘌呤饮食组与对照组两组间血尿酸水平出现显著差异时,进一步将高嘌呤饮食组随机分为两组,其中一组继续给予高嘌呤饮食（即高嘌呤饮食组）,另一组在高嘌呤饮食基础上进行罗格列酮干预（即罗格列酮干预组）,血尿酸在各组间有显著统计学差异时,处死所有大鼠。取大鼠肾皮质抽提总RNA,应用Taq Man实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术共扩增OAT1、UAT和内参照GAPDH目的片段,分析计算OAT1、UAT mRNA相对表达量。取大鼠肾组织制备石蜡切片,进行荧光免疫组织化学染色,Simple PCI图像分析软件分析OAT1、UAT的蛋白表达水平。结果①高嘌呤饮食后第11天,OLETF和LETO高嘌呤饮食组的血尿酸水平均较对照组显著升高（P=0.000）,OLETF高嘌呤饮食组较LETO高嘌呤饮食组亦显著升高（P=0.008）;②OLETF大鼠高嘌呤饮食组中,高尿酸血症的患病率为84.21%,LETO大鼠患病率为36.84%,两组发病率具有显著差异（P＜0.05）;③高嘌呤饮食后,OLETF大鼠高嘌呤饮食组OAT1 mRNA的表达水平较对照组明显降低（t’=21.690,P=0.000）,LETO大鼠高嘌呤饮食组与对照组相比无显著性差异（t’=-1.541,P=0.162）。OLETF大鼠高嘌呤饮食组OAT1 mRNA的表达水平与LETO大鼠高嘌呤饮食组相比亦显著降低（P=0.000）;④高嘌呤饮食后,LETO大鼠高嘌呤饮食组UAT mRNA的表达水平较对照组明显降低（t’=8.241,P=0.000）,OLETF大鼠高嘌呤饮食组UAT mRNA的表达水平较对照组亦明显降低（t’=23.090,P=0.000）,且其降低程度较LETO鼠更甚（P＜0.05）。⑤罗格列酮干预后第21天,高嘌呤饮食组血尿酸水平显著高于对照组（P=0.002）,而罗格列酮干预组显著低于高嘌呤饮食组（P=0.047）,与对照组相比无显著差异（P=0.183）;⑥实时荧光定量结果显示:OLETF大鼠高嘌呤饮食组及罗格列酮干预组OAT1、UAT mRNA的表达水平均显著低于对照组（P＜0.05）,罗格列酮干预组OAT1、UAT mRNA的表达水平较高嘌呤饮食组显著升高（P＜0.05）,但仍明显低于对照组（P＜0.05）。⑦荧光免疫组化结果显示:对照组、高嘌呤饮食组及罗格列酮干预组肾脏近端小管上皮细胞均有OAT1、UAT的表达。Simple PCI软件分析结果示:高嘌呤饮食组OAT1、UAT的吸光度值较对照组明显降低（P＜0.05）,罗格列酮干预组OAT1、UAT的吸光度值较高嘌呤饮食组明显升高（P＜0.05）。结论高嘌呤饮食可导致代谢综合征大鼠（OLETF大鼠）血尿酸水平的显著升高,且其高尿酸血症的发病率显著高于同系正常大鼠（LETO大鼠）,其机制可能与高嘌呤饮食后OLETF大鼠OAT1、UAT的表达较LETO大鼠显著降低有关;罗格列酮可以显著降低OLETF大鼠高嘌呤饮食后的血尿酸水平,其机制可能为罗格列酮显著改善胰岛素抵抗,降低胰岛素水平,间接上调OAT1、UAT基因的表达,进而显著增加肾脏尿尿酸的排泄,降低血尿酸水平。目的观察不同浓度脂蛋白对肾小管上皮细胞（HK-2细胞）人尿酸盐转运子（humanurate transporter hUAT）mRNA和人尿酸盐转运蛋白（human organic aniontransporter 1,hOAT1）mRNA表达的影响表达的影响。方法所有实验均在体外培养的HK-2细胞上进行。根据培养液中所含脂蛋白,将HK-2细胞分为3大组。①单纯采用DMEM培养基组（对照组）;②极低密度脂蛋白（VLDL）组:V1组:DMEM/F-12+50ug/ml VLDLV2组:DMEM/F-12+400ug/ml VLDL。③高密度脂蛋白（HDL）组:H1组:DMEM/F-12+50ug/mlHDL H2组:DMEM/F-12+400ug/ml HDL。每种条件下,均培养6瓶细胞取均数,培养48小时,收集细胞,计数,抽提总RNA。取IugRNA逆转录为cDNA,荧光定量PCR共扩增hUAT、hOAT1和内参照GAPDH目的片段,分析计算hUAT和hOAT1 mRNA相对表达量。整个实验过程重复一次。统计学分析采用t检验和单因素方差分析,显著性标准为P＜0.05。结果①所有标本均能检测到hUAT和hOAT1 mRNA的表达。②随着VLDL浓度的增加,hUAT mRNA表达水平明显下降;对照组hUAT mRNA表达水平明显高于V1、V2组,差异有显著性（P=0.000）,hUATmRNA表达水平V1组和V2组间差异有显著性（P＜0.001）。③随着VLDL浓度的增加,hOAT1mRNA表达水平明显下降;对照组hOAT1 mRNA表达水平明显高于V1、V2组,差异有显著性（P=0.000）。V1和V2组间差异无显著性（P=0.927）④随HDL浓度的增加,hUAT mRNA表达水平下降;对照组hUAT 1mRNA表达水平明显高于H1、H2组,差异有显著性（P=0.000）,H1组和H2组间差异有显著性（P＜0.05）。⑤随HDL浓度的增加,hOAT1 mRNA表达水平增加;对照组hOAT1 mRNA表达水平明显低于H1、H2组,差异有显著性（P=0.000）,H1组和H2组间差异无显著性（P＞0.05）。结论VLDL,HDL水平升高所导致的hUATmRNA表达水平下调,可能是脂代谢紊乱引起高尿酸血症的重要机制。HDL对hOAT1 mRNA表达水平上调作用,提示HDL可能具有一定的增加尿酸排泄作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 第一部分:高嘌呤饮食及罗格列酮干预对OLETF大鼠血尿酸水平的影响及其机制的研究
• 正文
• 前言
• 第一章 实验材料
• 第二章 实验方法
• 第三章 实验结果
• 讨论
• 附图表
• 参考文献
• 第二部分:脂代谢紊乱对肾小管上皮细胞hUAT和hOAT1基因表达的影响
• 正文
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 附图表
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 学位论文评阅及答辩情况表
• 三篇相关的英文论文