论文摘要
目的:探讨环氧合酶2（cyclooxygenase-2、Cox-2）及其前列腺素产物TXA2/PGI2在大鼠肝移植缺血再灌注（LT-IR）损伤中的表达规律及作用。为临床治疗和改善移植肝脏缺血再灌注损伤提供理论基础。方法:雄性SD大鼠随机分为6组:E1对照组、E2肝脏缺血再灌注损伤组、E3特异性Cox-2抑制剂+缺血再灌注损伤组、E4肝脏移植组、E5特异性Cox-2抑制剂+肝脏移植组,手术后或门静脉开放后3h、6h、12h、24h留取标本保存待检测,E6组大鼠肝脏切取后在无钙D-Hanks液中保存1h,3h后留取标本检测。放射免疫法（Radio-immunity assay）检测6-Keto-PGF-1a、TxB2（分别为PGI2、TXA2的稳定代谢产物）在血清及组织中的水平。两步法逆转录-聚合酶链式反应RT-PCR检测各组肝组织中Cox-2mRNA的表达;酶联免疫吸附试验ELISA法检测TNF-a在冷保存肝脏组织中的表达;免疫组化法检测Cox-2在组织中的定位及表达;HE染色确定组织损伤程度并统计。结果:1.血清AST、ALT水平:E2、E3、E4、E5与E1组比较明显升高（P＜0.05）,而在E3及E5中明显低于E2和E4组,且E4组明显高于E2组（P＜0.05）;2.Cox-2免疫组化显示阳性细胞主要是分布于汇管区肝窦内皮细胞、肝细胞及巨噬细胞胞内;E2、E3、E4、E5组中Cox-2mRNA表达水平明显高于对照组E1组;术前给予cox-2抑制剂的大鼠Cox-2mRNA表达水平明显降低。免疫组化显示给予Cox-2抑制剂的大鼠肝脏内Cox-2表达明显低于未给抑制剂组大鼠;在冷保存1h后肝组织中表达明显增加,3h后的表达较1h组有所增加（P＞0.05）。3.各组6-Keto-PGF-1a、TXB2水平均比对照组明显升高（P＜0.05）、且以TXB2升高显著,TXB2/6-Keto-PGF-1a比值升高,E3和E5组术前给予Cox-2抑制剂后6-Keto-PGF-1a、TXB2水平均明显降低,以TXB2降低较明显,TXB2/6-Keto-PGF-1a、比值降低或恢复平衡。肝移植组E4组TXB2、6-Keto-PGF-1a明显高于肝脏缺血再灌注组E2组;E6组中TXB2、6-Keto-PGF-1a在冷保存1h、3h后肝组织中含量明显增加,但1h、3h相比数据缺乏统计意义。4.HE染色见移植组E4的损伤重于缺血再灌注损伤组E2,E3及E5给予Cox-2抑制剂能明显改善移植肝脏的病理损害（P＜0.05）。冷保存对肝细胞的损伤表现以细胞水肿为主,冷保存3h后肝细胞坏死有所增加。5.TNF-a在冷保存1h后的肝脏组织中表达即可增加,但在冷保存3h后并未见进一步增高（P＞0.05）。结论:肝移植缺血再灌注损伤的发生是在冷保存性损伤的基础上进一步加重的再灌注性损伤;Cox-2在肝移植缺血再灌注损伤中具有损伤性作用,抑制Cox-2的高表达可通过纠正其下游的TXA2/PGI2系统失衡而改善肝脏的微循环,减轻移植肝脏的损伤。TXA2/PGI2及TNF-a在移植肝脏冷保存时的变化可能对冷保存性损伤具有重要的作用。
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