Ferroplasma thermophilum L1的分离、鉴定及应用于黄铜矿浸出的研究

Ferroplasma thermophilum L1的分离、鉴定及应用于黄铜矿浸出的研究

论文摘要

生物冶金技术是一种从矿物中提取金属的方法,特别适于处理贫矿和废矿,并具有成本低、投入小、能耗低、环境污染小等突出优点。在本文研究中,一株极端嗜酸中等嗜热的氧化亚铁古菌得到分离纯化,并鉴定为Ferroplasma属的一个新种。为了研究该古菌在硫化矿浸出中的作用,从古菌的生理生化特性出发,研究了喜温硫杆菌杆菌(Acidithiobacillus caldus)、嗜铁钩端螺旋菌(Leptospirillumferriphilum)、嗜酸硫化杆菌(Sulfobacillus acidophilus)与该古菌的不同组合对黄铜矿的浸出,同时考察了浸出过程中pH、亚铁离子浓度、三价铁离子浓度和铜离子浓度等参数的变化,并应用Real-timePCR技术考察了微生物种群的变化,讨论了以上各菌株浸出黄铜矿的机理。从浸矿反应器的浸出液中分离得到一株氧化亚铁古菌L1。对菌株L1进行了形态、生理生化特性研究。球状,不可运动,没有细胞壁,菌体直径大小0.4~1.0μm。最适生长温度在45℃左右,最适初始生长pH为1.0,代时约为6.65 h。可在硫酸亚铁和酵母粉同时存在的条件下兼性营养型生长,但是在只有硫酸亚铁或酵母粉的情况下该菌株不能生长。该菌株不能利用蛋白胨、葡萄糖、乳糖和半乳糖等有机物以及硫磺、硫代硫酸钠等还原态的硫进行生长。菌株L1基因组DNA G+C含量为34.1mol%。基于16S rRNA序列同源性构建了系统发育树,结果表明此株菌是属于Ferroplasma属的古菌,与F.cupricumulans BH2T具有99.0%的序列相似性。菌株L1与F.cupricumulans BH2T的分子杂交相似度为46.3%。基于以上实验结果表明菌株L1应代表Ferroplasma属的一个新种,命名为F.thermophilum L1(CCTCC AB207143T)。利用喜温硫杆菌杆菌、嗜铁钩端螺旋菌、嗜酸硫化杆菌和菌株L1四种菌的不同组合进行黄铜矿摇瓶浸出实验。化能自养和化能兼性生长的中等嗜热菌同时存在能有效促进黄铜矿的浸出速率和浸出效率。具有不同生理特性(包括铁硫转换和有机物与无机物的利用)的菌株之间的相互作用有利于促进黄铜矿的浸出。在含有嗜铁钩端螺旋菌的浸出体系中,黄铜矿浸出速率在浸出15-20天后开始下降,这与浸出过程中在矿物表面形成的黄钾铁矾钝化膜有关。各浸矿体系矿渣的X-衍射分析表明Fe3+浓度较低的浸矿液中没有黄钾铁矾的形成,相对于pH,Fe3+的浓度可能是黄钾铁矾形成的更重要原因。利用实时荧光定量PCR技术对浸矿微生物种群的分析表明,在浸矿初期喜温硫杆菌杆菌和嗜铁钩端螺旋菌占较大的比例,但是到了浸矿后期嗜铁钩端螺旋菌在种群中的比例明显降低。F.thermophilum在浸矿前期占据很少的数量,而到浸矿后期在种群中占据较大比例。嗜酸硫化杆菌在种群中的比例没有太大变化。实验结果也是与它们的生理生化特性相适应的。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 目录
  • 第一章 绪论
  • 1.1 生物冶金技术研究进展
  • 1.1.1 生物浸出工艺
  • 1.1.2 生物冶金中存在的问题
  • 1.2 生物冶金环境中的微生物
  • 1.2.1 中温微生物
  • 1.2.2 中等高温微生物
  • 1.2.3 极端高温微生物
  • 1.3 中等嗜热嗜酸浸矿微生物Ferroplasma属古菌的研究进展
  • 1.4 微生物群落多样性分析的分子生物学方法
  • 1.4.1 遗传指纹图谱技术对微生物群落的分析
  • 1.4.2 核酸杂交技术对微生物群落的分析
  • 1.4.3 基因序列系统发育分析法
  • 1.4.4 实时定量PCR技术对微生物群落的分析
  • 1.5 本文的研究目的与研究内容
  • 1.5.1 本文研究的目的和意义
  • 1.5.2 本文研究的主要内容
  • 第二章 极端嗜酸氧化亚铁古菌F.thermophilum L1的分离与鉴定
  • 2.1 材料和方法
  • 2.1.1 样品和菌种来源
  • 2.1.2 培养基
  • 2.1.3 分离和形态观察
  • 2.1.4 生理生化特性分析
  • 2.1.5 全细胞脂肪酸组分分析
  • 2.1.6 分子水平鉴定
  • 2.1.7 菌株L1的浸矿能力分析
  • 2.2 结果与分析
  • 2.2.1 菌株的形态特征
  • 2.2.2 最适温度和pH
  • 2.2.3 底物利用特性
  • 2.2.4 生长曲线和亚铁氧化速率
  • 2.2.5 抗性特征
  • 2.2.6 厌氧培养特性
  • 2.2.7 脂肪酸分析
  • 2.2.8 16S rRNA基因序列分析
  • 2.2.9 基因组DNA G+C含量和DNA-DNA杂交
  • 2.2.10 菌株L1的浸矿特性
  • 2.3 讨论
  • 2.4 本章小结
  • 第三章 F.thermophilum L1与其他中等嗜热菌混合浸出黄铜矿的研究
  • 3.1 材料和方法
  • 3.1.1 微生物和培养基
  • 3.1.2 矿物来源及成分分析
  • 3.1.3 生物浸出实验
  • 3.1.4 物理化学分析
  • 3.2 实验结果
  • 3.2.1 中等嗜热混合菌浸出黄铜矿
  • 3.2.2 矿渣的XRD分析
  • 3.3 分析和讨论
  • 3.4 本章小结
  • 第四章 应用Real-time PCR分析中等嗜热复合菌浸出黄铜矿的种群动态
  • 4.1 材料和方法
  • 4.1.1 基因组DNA的提取
  • 4.1.2 特异性引物的设计和检测
  • 4.1.3 PCR和Real-time quantitative PCR
  • 4.2 实验结果
  • 4.2.1 引物特异性
  • 4.2.2 Real-time quantitative PCR技术用于种群分析的检测
  • 4.2.3 应用Real-time quantitative PCR技术分析中等嗜热混合菌群
  • 4.3 分析和讨论
  • 4.4 本章小结
  • 第五章 结论与展望
  • 5.1 结论
  • 5.2 展望
  • 参考文献
  • 致谢
  • 硕士期间研究成果
  • 相关论文文献

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