本文主要研究内容
作者王忠星（2019）在《副结核分枝杆菌MAP1068蛋白酶活性及致病性研究》一文中研究指出：副结核病(Paratuberculosis)是由副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis,MAP)引起的反刍动物慢性消耗性疾病。该病主要在反刍动物中流行,以奶牛和黄牛最为易感,牛感染MAP后以持续性腹泻、进行性消瘦、肠黏膜增厚及形成皱襞为主要特征,因此又称副结核性肠炎。自1895年首次报道副结核病以来,已陆续在多个国家发现,目前已遍布全世界,我国于1975年发现该病。副结核病对养殖业的危害很大,尤其是奶牛和肉牛养殖行业,感染后奶牛的产奶量和肉牛的品质均受到不同程度的影响。MAP1068蛋白是一种保守性和种属差异性较高的蛋白,通过生物信息学预测,MAP1068蛋白属于一种半胱氨酸蛋白酶。在许多病原微生物中(如猪链球菌等)都有半胱氨酸蛋白酶的相关研究,半胱氨酸蛋白酶在病原微生物入侵宿主的过程中发挥了巨大作用,尤其是微生物在宿主体内定植和逃避宿主免疫方面。本研究通过构建重组质粒pET28a-MAP1068,在大肠杆菌中表达和纯化MAP1068蛋白,并以此蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠制备了多抗,筛选出了MAP1068蛋白发挥活性所需的最佳底物,证实了二价金属离子可以提高MAP1068蛋白的酶活性,并测定了发挥作用的最佳温度和最佳pH值。定点突变研究显示,C195、H238和D258氨基酸残基为MAP1068蛋白酶的活性催化中心,特别是D258对MAP1068的活性影响最大。为了研究MAP1068蛋白酶对小鼠的致病性,将pMV261穿梭载体转入耻垢分枝杆菌构建重组耻垢分枝杆菌pMV261/MS;map1068基因连接pMV261载体转入耻垢分枝杆菌,构建重组耻垢分枝杆菌MAP1068/MS;以重组质粒pMV261-MAP1068为模板,通过定点突变构建突变体重组菌D258A/MS。将三种重组菌(pMV261/MS,MAP1068/MS和D258A/MS)分别感染小鼠进行致病性研究。病理结果显示重组耻垢分枝杆菌MAP1068/MS和突变株D258A/MS均能对小鼠肝脏、脾脏、肺脏产生病理损伤。血清中细胞因子检测结果显示,重组耻垢分枝杆菌MAP1068/MS和突变株D258A/MS可以引起不同细胞因子的变化,从而导致不同程度的炎性反应。结果表明,MAP1068蛋白作为一种胞外蛋白酶具有蛋白酶的特性并且具有一定的致病性,通过定点突变后,其体外活性会部分丧失,但对小鼠的致病性无明显变化。本实验为副结核分枝杆菌致病机制的研究提供了新的思路,并为科学防控和治疗副结核病奠定了基础。
Abstract
fu jie he bing (Paratuberculosis)shi you fu jie he fen zhi gan jun (Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis,MAP)yin qi de fan chu dong wu man xing xiao hao xing ji bing 。gai bing zhu yao zai fan chu dong wu zhong liu hang ,yi nai niu he huang niu zui wei yi gan ,niu gan ran MAPhou yi chi xu xing fu xie 、jin hang xing xiao shou 、chang nian mo zeng hou ji xing cheng zhou bi wei zhu yao te zheng ,yin ci you chen fu jie he xing chang yan 。zi 1895nian shou ci bao dao fu jie he bing yi lai ,yi liu xu zai duo ge guo jia fa xian ,mu qian yi bian bu quan shi jie ,wo guo yu 1975nian fa xian gai bing 。fu jie he bing dui yang shi ye de wei hai hen da ,you ji shi nai niu he rou niu yang shi hang ye ,gan ran hou nai niu de chan nai liang he rou niu de pin zhi jun shou dao bu tong cheng du de ying xiang 。MAP1068dan bai shi yi chong bao shou xing he chong shu cha yi xing jiao gao de dan bai ,tong guo sheng wu xin xi xue yu ce ,MAP1068dan bai shu yu yi chong ban guang an suan dan bai mei 。zai hu duo bing yuan wei sheng wu zhong (ru zhu lian qiu jun deng )dou you ban guang an suan dan bai mei de xiang guan yan jiu ,ban guang an suan dan bai mei zai bing yuan wei sheng wu ru qin su zhu de guo cheng zhong fa hui le ju da zuo yong ,you ji shi wei sheng wu zai su zhu ti nei ding zhi he tao bi su zhu mian yi fang mian 。ben yan jiu tong guo gou jian chong zu zhi li pET28a-MAP1068,zai da chang gan jun zhong biao da he chun hua MAP1068dan bai ,bing yi ci dan bai wei kang yuan mian yi BALB/cxiao shu zhi bei le duo kang ,shai shua chu le MAP1068dan bai fa hui huo xing suo xu de zui jia de wu ,zheng shi le er jia jin shu li zi ke yi di gao MAP1068dan bai de mei huo xing ,bing ce ding le fa hui zuo yong de zui jia wen du he zui jia pHzhi 。ding dian tu bian yan jiu xian shi ,C195、H238he D258an ji suan can ji wei MAP1068dan bai mei de huo xing cui hua zhong xin ,te bie shi D258dui MAP1068de huo xing ying xiang zui da 。wei le yan jiu MAP1068dan bai mei dui xiao shu de zhi bing xing ,jiang pMV261chuan suo zai ti zhuai ru chi gou fen zhi gan jun gou jian chong zu chi gou fen zhi gan jun pMV261/MS;map1068ji yin lian jie pMV261zai ti zhuai ru chi gou fen zhi gan jun ,gou jian chong zu chi gou fen zhi gan jun MAP1068/MS;yi chong zu zhi li pMV261-MAP1068wei mo ban ,tong guo ding dian tu bian gou jian tu bian ti chong zu jun D258A/MS。jiang san chong chong zu jun (pMV261/MS,MAP1068/MShe D258A/MS)fen bie gan ran xiao shu jin hang zhi bing xing yan jiu 。bing li jie guo xian shi chong zu chi gou fen zhi gan jun MAP1068/MShe tu bian zhu D258A/MSjun neng dui xiao shu gan zang 、pi zang 、fei zang chan sheng bing li sun shang 。xie qing zhong xi bao yin zi jian ce jie guo xian shi ,chong zu chi gou fen zhi gan jun MAP1068/MShe tu bian zhu D258A/MSke yi yin qi bu tong xi bao yin zi de bian hua ,cong er dao zhi bu tong cheng du de yan xing fan ying 。jie guo biao ming ,MAP1068dan bai zuo wei yi chong bao wai dan bai mei ju you dan bai mei de te xing bing ju ju you yi ding de zhi bing xing ,tong guo ding dian tu bian hou ,ji ti wai huo xing hui bu fen sang shi ,dan dui xiao shu de zhi bing xing mo ming xian bian hua 。ben shi yan wei fu jie he fen zhi gan jun zhi bing ji zhi de yan jiu di gong le xin de sai lu ,bing wei ke xue fang kong he zhi liao fu jie he bing dian ding le ji chu 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自吉林农业大学的王忠星，发表于刊物吉林农业大学2019-10-24论文，是一篇关于副结核分枝杆菌论文,蛋白酶论文,活性论文,致病性论文,吉林农业大学2019-10-24论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自吉林农业大学2019-10-24论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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