磁性纳米粒子高效纯化及双色荧光量子点探针筛查外周血肺癌微转移方法的研究

论文摘要

肺癌现已成为全球范围内对人类健康威胁最大的恶性肿瘤之一,尽管手术能够完全切除局部病灶,但仍有患者在5年内复发和转移,因此科学家提出微转移的概念,认为如果能及时诊断出微转移,患者将有可能得到更及时、系统和有针对性的治疗。磁性纳米粒子以其优越的物理特性在生物分离领域显示出独特的优势,荧光量子点与有机荧光染料相比具有独特的光学特性,在荧光标记领域的应用也突显优势。本文通过将广谱角蛋白pan-ck抗体偶联到Fe3O4磁性纳米粒子表面,肺组织特异性Lunx抗体及SP-A抗体偶联到水溶性CdTe荧光量子点表面,然后利用已标识有pan-ck抗体的磁性纳米粒子进行外周血癌细胞的富集与分选,最后应用连接有Lunx和SP-A抗体的荧光量子点对富集到的细胞进行肺组织特异性鉴定,以实现对肺癌微转移的诊断。本研究成功地将pan-ck抗体偶联到磁性纳米粒子表面,Lunx和SP-A抗体偶联到荧光量子点表面,并且能够从外周血中富集与分选到癌细胞,通过双色荧光量子点探针成功地对细胞内两种蛋白的表达进行了同步鉴定,明显提高了鉴定的效率与准确性,为进一步建立外周血肺癌微转移方法奠定了较好的研究基础。

论文目录

• 提要
• 英文缩写词
• 绪论
• 第一篇 文献综述
• 第二篇 实验研究
• 3O₄磁性纳米粒子及水溶性CdTe 荧光量子点的制备与修饰'>第1章 Fe₃O₄磁性纳米粒子及水溶性CdTe 荧光量子点的制备与修饰
• 3O₄ 磁性纳米粒子的制备与修饰'>1.1 Fe₃O₄磁性纳米粒子的制备与修饰
• 1.1.1 材料与方法
• 1.1.1.1 试剂与仪器
• 1.1.1.2 实验方法
• 1.1.2 结果
• 1.1.3 讨论
• 1.2 水溶性CdTe 荧光量子点的制备与修饰
• 1.2.1 材料与方法
• 1.2.2 水溶性CdTe 荧光量子点的制备
• 1.2.2 结果
• 1.2.3 讨论
• 3O₄磁性纳米粒子及CdTe 荧光量子点与抗体分子的偶联'>第2章 Fe₃O₄磁性纳米粒子及CdTe 荧光量子点与抗体分子的偶联
• 3O₄ 磁性纳米粒子与广谱角蛋白pan-ck 抗体的偶联'>2.1 Fe₃O₄ 磁性纳米粒子与广谱角蛋白pan-ck 抗体的偶联
• 2.1.1 材料与方法
• 2.1.2 结果
• 2.1.3 讨论
• 2.2 水溶性CdTe 荧光量子点与肺组织特异性抗体的偶联
• 2.2.1 材料与方法
• 2.2.2 结果
• 2.2.3 讨论
• 第3章 免疫磁性纳米粒子富集与分选模拟外周血癌细胞方法的研究
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 试剂、仪器与溶液配制
• 3.1.2 实验方法
• 3.2 结果
• 3.2.1 广谱角蛋白pan-ck 抗体在上皮型癌细胞表达的鉴定
• 3.2.2 磁性纳米粒子-pan-ck 抗体复合物富集癌细胞效率结果图
• 3.2.3 磁性纳米粒子-pan-ck 抗体复合物富集癌细胞HE 染色结果
• 3.3 讨论
• 第4章 水溶性CdTe 荧光量子点标记抗体鉴定肺癌细胞
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 试剂、仪器与溶液配制
• 4.1.2 实验方法
• 4.1.2.1 免疫细胞化学法鉴定四种上皮型癌细胞表达Lunx 蛋白情况
• 4.1.2.2 免疫细胞化学法鉴定四种上皮型癌细胞表达SP-A 蛋白情况
• 4.1.2.3 量子点标记抗体检测四种癌细胞株表达肺组织特异性蛋白情况
• 4.1.2.4 荧光量子点标记抗体鉴定磁性纳米粒子富集细胞
• 4.1.2.5 荧光量子点双标抗体鉴定肺癌患者外周血富集细胞情况
• 4.2 结果
• 4.2.1 免疫细胞化学法检测四种癌细胞株表达Lunx 蛋白情况
• 4.2.2 免疫细胞化学法检测四种癌细胞株表达SP-A 蛋白情况
• 4.2.3 荧光量子点标记抗体检测四种癌细胞株表达肺组织特异性蛋白情况
• 4.2.4 免疫细胞化学法及荧光量子点标记法对肺组织特异性蛋白鉴定情况
• 4.2.6 富集癌细胞后荧光量子点双标探针鉴定细胞肺组织特异性
• 4.2.7 荧光量子点双标抗体鉴定肺癌患者外周血富集细胞情况
• 4.3 讨论
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢
• 中文摘要
• Abstract