朴明姬（大连大学附属中山医院肾内科辽宁大连116001）
【摘要】目的研究肾康注射液对肾间质纤维化大鼠氧化应激状态的影响。方法采用单侧输尿管梗阻(UUO)诱导肾间质纤维化大鼠模型，将36只10周龄SD大鼠随机分为3组:假手术组、UUO组和治疗组（肾康注射液组）。三组大鼠于术后20天处死，取左肾组织做HE染色观察和评价炎症程度，检测左肾组织总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力、丙二醛（MDA）含量，检测大鼠血尿素氮（BUN）和肌酐(Scr)。结果大鼠行单侧输尿管结扎20天后,对照组肾脏病理未见明显炎症改变,UUO组梗阻侧肾脏明显肿大，肾实质变薄，肾间质水肿，弥漫炎细胞浸润，肾小管扩张或萎缩，肾间质纤维化。与假手术组相比UUO组肾组织中T-SOD和GSH-Px明显下降，但MDA明显升高。肾康注射液治疗后，肾组织T-SOD和GSH-Px活性显著性升高、MDA含量显著下降。结论单侧输尿管梗阻可以诱导大鼠肾间质纤维化，氧化应激（OS）参与肾间质纤维化形成，肾康注射液可以减轻肾间质纤维化大鼠氧化应激状态。
【关键词】肾康注射液肾间质纤维化氧化应激
【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）38-0081-02
肾间质纤维化是各种炎症和非炎症性肾脏疾病进展的最终结局，是所有慢性进行性肾脏疾病进展到终末期肾衰竭的共同形态学特点[1-2]。目前认为肾间质纤维化受多方面因素的影响，如蛋白尿、高血糖、高血压、缺氧、药物等。大量资料表明，在各种病因导致的肾间质纤维化过程中，OS起到重要的作用[3]。本实验以单侧输尿管梗阻模型为研究对象，研究肾康注射液对肾间质纤维化大鼠OS的影响，以探讨肾康注射液对肾间质纤维化的保护作用及其机制。
1材料与方法
1.1材料SD雌性大鼠36只，体重200－220g（大连医科大学实验动物中心提供)。实验前于本院动物实验中心饲养两周，饲养环境为清洁级。制模型前禁食水12小时。
1.2方法
1.2.1动物模型的建立与标本收集雌性大鼠36只随机分为3组（每组12只）:假手术组、UUO组、治疗组（肾康注射液由西安世纪盛康药业有限公司提供）。10％水合氯醛0.4mL.(100g)-1腹腔注射麻醉大鼠，麻醉起效后后行左侧耻骨上切口打开腹腔,沿左肾下极寻找到左输尿管,用4.0丝线上下结扎两处,然后从中剪断输尿管以防逆行性感染。假手术组大鼠打开腹腔后分离左侧输尿管但不结扎,随即关闭腹腔。治疗组于术前1d开始用肾康注射液腹腔注射每天一次（10g/kg,每支内含生药6g），共计给药20d。假手术组和UUO组以等量蒸馏水灌胃20d。第20天各组大鼠腹主动脉取血制备血清,测定血BUN和Scr，取一半左侧肾组织,-80℃冰箱保存，取另一半左侧肾组织用10%中性甲醛溶液固定，石蜡包埋备用。
1.2.2病理学观察石蜡切片，按常规方法制片后行HE染色,光镜观察肾间质纤维化情况。
1.2.3肾组织T-SOD、GSH-Px、MDA含量测定黄嘌呤氧化酶法测定左肾组织的T-SOD活力，直接检测法测定GSH-Px，硫代巴比妥酸（TBA）法测定MDA含量（测试盒由南京建成生物工程研究所提供）。
1.2.4数据x-±s表示,组间差异比较采用SPSS12.0软件单因素方差分析，组间两两比较采用q检验。以P<0.05为有统计学意义。
2结果
2.1肾脏病理改变HE染色中假手术组大鼠的肾小球和肾小管结构基本正常，UUO组梗阻肾脏中可见肾间质水肿、纤维化,远端肾小管与近曲小管均扩张,部分萎缩坏死，见大量纤维细胞增生和淋巴单核细胞浸润出现肾间质纤维化,但肾小球无明显改变。治疗组有轻度肾小管上皮萎缩,肾小管扩张,间质中有单核细胞浸润,肾间质纤维化程度明显轻于UUO组。
2.2各组大鼠肾功、肾组织的T-SOD、GSH-PX、MDA测定水平（见表l）。与假手术组比较，UUO组血BUN、Scr升高（▲P<0.05），T-SOD和GSH-Px活性下降（▲P<0.05），MDA含量升高（▲P<0.05），肾康注射液治疗后以上指标明显好转（*P<0.05）。
表1各组大鼠血BUN、Scr、肾组织T-SOD、GSH-Px、MDA
含量测定水平(x-±s)
注：与假手术组比较，▲P<0.05;与UUO组比较,*P<0.05
3讨论
肾间质纤维化是以肾小管萎缩，间质成纤维细胞增生及细胞外基质过度积聚为特征的病理改变，肾小管-间质的损害程度与慢性肾脏疾病患者的肾功能损害程度呈正相关。UUO模型肾脏病理损伤与肾缺血、低氧、血管紧张素Ⅱ、转化生长因子（TGF-β1）、肿瘤坏死因子、OS等有关[4]。OS是导致肾间质纤维化的重要的原因之一。OS是指体内活性氧的生成增加和（或）清除活性氧的能力降低，过量的活性氧引起分子、细胞膜的损伤。T-SOD、GSH-PX、MDA是反映氧化应激反应的指标[5]。T-SOD和GSH-Px能保护细胞，降低细胞凋亡和死亡的风险，可反映机体清除自由基的能力。T-SOD和GSH-Px活性下降可导致氧自由基在肾小管上皮细胞内积聚，造成细胞损伤。氧自由基增多又通过膜脂质过氧化或氧化酶活性基团等多种途径影响酶活性。脂质过氧化是指在自由基的攻击下不饱和脂肪酸发生过氧化反应，从而生成一系列活性氧的复杂过程。脂质过氧化可破坏细胞膜的结构与功能，引发细胞周围炎症。MDA作为脂质过氧化物，间接反映细胞损伤的程度。本研究中我们发现单侧输尿管梗阻可以诱导大鼠肾间质纤维化，UUO组T-SOD和GSH-Px活性低于假手术组、MDA含量高于假手术组，说明氧化应激反应参与肾间质纤维化，这与国外诸多学者的观察结果一致。
肾康注射液由大黄、丹参、红花和黄芪4味中药组成，肾康注射液作为中药复方制剂，具有多因素、多靶点、综合表现药效的特点。其中大黄为主方，可通腑泄浊、消除水肿、具有抑制细胞因子、生长因子生成，抑制肾小球系膜细胞增生及成纤维细胞的增殖作用。大黄提取物可抑制慢性肾功能衰竭患者的残余肾单位代偿性肥大，降低肾小管高代谢，减轻肾间质纤维化。黄芪在我国传统医学的长期临床实践中已证实可有效治疗肾脏疾病，其化学成分以甙类、黄芪多糖（APS）、黄芪总黄酮（TFA）、黄芪皂苷（TSA）、多种氨基酸、胡萝卜素、微量元素等组成。具有益气养元、扶正祛邪、养心通脉、健脾利湿等功效。近年研究证实黄芪可以通过改善肾脏血液动力学、调节细胞因子表达分泌等途径，延缓肾间质纤维化进展[6]。丹参的抗肾纤维化的有效成分主要为丹参总酚酸、丹参酚酸B、丹参酮等多种[7]。张东亮[8]等在腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠动物模型中发现，用复方丹参合剂可下调TGF-β1的产生，延缓肾功能恶化，保护肾功能。本研究结果显示，用肾康注射液治疗后，肾组织T-SOD和GSH-Px活性显著性升高、MDA含量显著下降，这说明肾康注射液可以清除氧自由基、提高抗氧化活性、减轻氧化作用所致的肾损伤。
综上所述，UUO大鼠存在明显的氧化应激状态，肾康注射液可以减轻氧化应激反应，这对早期防治肾间质纤维化有重要的临床指导意义。
参考文献
[1]NishiyamaA.AbeY.Molecularmechanismsandtherapeuticstrategiesofchronicrenalinjury:renoprotectiveeffectsofsldosteroneblockade[J].JpharmacolSci,2006,100(1)：9-16．
[2]KlahrS.Progressionofchronicrenaldisease[J].HeartDis,2001,3(3):205-9.
[3]张晓暄，李银辉，郑伟等.单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化中氧化应激的变化[J].中国现代医学杂志，2007,17(4):45-67.
[4]KlahrS,JeremiahM.Obstructivenephropathyandrenalfibro-sis[J].AmJPhysiolRenalPhysiol,2006,283:861-875．
[5]Nakayama,K.,Terawaki,H.eral.Reductionofserumantioxidativecapaciyduringhemodialysis[J].ClinExpNephro,2008,111(3):218-224．
[6]陈清江，杨丽，王辉等.黄芪对人肾间质成纤维细胞增殖和转化生长因子-β表达的影响[J].郑州大学学报（医学版），2005,40（5）：871-873.
[7]李均等.黄芪丹参有效组分及其配伍抗肾纤维化的体内研究进展[J].中国中西医结合肾脏病杂志，2010,11（9）：841.
[8]张东亮，王志刚.复方丹参合剂对肾间质纤维化影响的研究[J].中华实用中西医杂志，2004,4（7）：509-511.