运输应激仔猪组织的应激性损伤及Hsp47、Hsp60表达

论文摘要

本试验选择纯种皮特兰（12）头和二花脸（24头）两个品种仔猪,置于相同的饲养管理条件下饲养.待仔猪体重达到20±1kg时,随机选取6头皮特兰和12头二花脸仔猪作为运输组,在常规路段上进行2 h运输应激（车速为60千米/小时）,同时将其余两个品种的仔猪饲养于正常饲养环境中作为对照组。2 h运输应激结束后,将所有运输和对照组受试仔猪均先行注射戊巴比妥钠（10 mg/kg）麻醉后再进行剖杀。采取血液,分离血清,于-20℃保存用于肌酸激酶（creatine kinase,CK）和谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）的检测;采取心脏、肝脏、肾脏和胃等组织,一部分固定于4%的多聚甲醛溶液中以备组织病理学、Hsp47和Hsp60的免疫组织化学定位检测,另一部分迅速置于液氮中速冻,并保存于-70℃冰箱,用于Hsp47和Hsp60的定量检测。比色法检测结果显示,运输应激2 h后,二花脸仔猪血清中的CK活性显著升高（P＜0.05）,皮特兰仔猪血清中的CK含量升高,差异极显著（P＜0.01）;二花脸和皮特兰仔猪血清中AST的活性在运输应激后均显著高于对照组（P＜0.05）.病理组织学检测结果表明,二花脸和皮特兰两个品种仔猪在运输应激2 h后,其心脏、肝脏、肾脏和胃均显示不同程度的以实质细胞呈现急性变性为特征的组织损伤,其中尤其以皮特兰仔猪的病理损伤表现更为明显,而两个品种的对照组仔猪均未见明显的病理变化。Hsp47和Hsp60在二花脸和皮特兰这两个品种仔猪心脏、肝脏、肾脏和胃中的免疫组织化学定位研究结果分别显示:Hsp47主要分布在心肌细胞的胞浆和胞核,肝小叶的中央静脉管壁和窦状隙内皮细胞,肾小球毛细血管和肾远曲小管上皮细胞胞浆和胞核,胃粘膜层和粘膜下层的疏松结缔组织;Hsp60则主要分布于心肌细胞和肝细胞的胞浆,肾近曲小管上皮细胞的胞浆,胃底腺腺体细胞的边缘。而且在组织细胞病理损伤越明显的部位,其中的Hsp60阳性信号越弱,这种现象尤其以心脏和肝脏中的表现更为明显。Hsp47和Hsp60在二花脸和皮特兰这两个品种仔猪心脏、肝脏、肾脏和胃中的酶联免疫吸附试验（ELISA）定量研究结果表明,经过2 h的运输应激后,Hsp47在两个品种仔猪的心脏和肝脏中的含量变化差异均不显著,但在皮特兰仔猪的肾脏和胃中含量则显著升高（P＜0.05）,Hsp47在二花脸仔猪的肾脏和胃中的含量变化差异不显著;Hsp60在两个品种仔猪的心脏中含量显著减少（P＜0.01）,在胃中的含量明显增加（P＜0.05）,Hsp60在皮特兰仔猪肝脏中的含量显著减少（P＜0.05）,在二花脸仔猪肝脏中的含量变化差异不显著,两个品种仔猪肾脏中Hsp60的含量变化差异均不显著。以上试验研究结果表明:（1）经过2 h的运输应激后,运输组仔猪的心脏、肝脏、肾脏和胃均显示不同程度的以实质细胞呈现急性变性为特征的病理损伤,组织损伤尤其以皮特兰仔猪的表现更为明显,说明皮特兰仔猪作为应激敏感猪,更容易在运输中受到应激性损伤。（2）免疫组织化学定位检测显示,病理损伤越明显的组织细胞处,其中的Hsp60阳性信号越弱,说明组织的应激性损伤与Hsp60的表达有一定关系。（3）2 h的运输应激后,Hsp47在皮特兰仔猪肾脏和胃中显著升高,Hsp60在皮特兰仔猪肝脏中显著减少,而这两种不同家族的蛋白在二花脸仔猪的相应组织中变化差异不显著,提示二花脸仔猪更能适应运输所致的应激,而皮特兰作为应激敏感猪,受到刺激后会迅速引起组织中Hsp47和Hsp60的表达异常。（4）二花脸和皮特兰仔猪在2 h运输后,心脏、肝脏、肾脏和胃四种组织的Hsp47和Hsp60含量变化无规律,或者升高或者降低,且差异的显著水平不同,说明不同家族的热休克蛋白在发挥其对组织的保护功能时,作用机制是不同的。即使是同一种热休克蛋白,在不同组织中的保护作用机制也可能不同,显示出Hsps的组织依赖性。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 部分缩写的中英文对照
• 第一篇 文献综述
• 第一章 应激与热休克蛋白
• 1 应激反应的基本表现
• 1.1 应激时机体的神经内分泌反应
• 1.2 应激时机体物质、机能代谢的变化
• 1.3 应激的细胞体液反应
• 2 猪常见的应激性疾病
• 2.1 猪应激综合征（porcine stress syndrome,PSS）
• 2.2 猪应激性溃疡（stress ulcer）
• 2.3 消化道菌群失调
• 2.4 其他应激性疾病
• 3 Hsps概述
• 3.1 Hsps成员
• 3.2 Hsps的生物学特性
• 3.3 Hsp47和Hsp60的分子结构
• 3.4 Hsps的基因表达与调控
• 3.5 Hsps的生物学功能
• 3.6 Hsps与疾病
• 参考文献
• 第二篇 试验研究
• 第二章 运输应激后二花脸和皮特兰仔猪组织中Hsp47、Hsp60的表达及组织应激性损伤
• 1 材料与方法
• 1.1 实验动物及试验设计
• 1.2 主要试验材料
• 1.3 CK与AST活性测定
• 1.4 病理组织切片制作及HE染色
• 1.5 免疫组织化学染色
• 1.6 酶联免疫吸附试验
• 1.7 统计分析
• 2.结果
• 2.1 CK与AST活性测定结果
• 2.2 运输应激后仔猪各组织的应激性损伤
• 2.3 Hsp47和Hsp60在受试仔猪各组织中的定位
• 2.4 Hsp47和Hsp60在受试仔猪各组织中的定量检测
• 3 讨论
• 参考文献
• 全文总结
• 附录 主要试剂配制
• 致谢
• 论文发表情况