一株甘草根瘤菌N003发酵液活性及次生代谢产物研究

论文摘要

大量研究表明,内生菌能够产生与宿主相同或相似的活性成分。因此,植物内生菌的研究越来越被科学界关注。根瘤菌是作为内生菌群中的一部分,数个世纪以来人们对根瘤菌的研究多集中在豆科植物和根瘤菌的共生固氮方面,而对它的活性及化学成分研究较少。本文以一株分离自新疆巴楚县乌拉尔甘草的甘草根瘤菌N003为研究对象,对甘草根瘤菌发酵原液的化感活性、对真菌和细菌的抑制活性以及其次生代谢产物进行了研究。研究发现甘草根瘤菌N003的发酵液对苋菜和莴苣的萌发以及种子幼苗的生长有明显的抑制作用,并且明显的抑制小麦、油菜和莴苣幼根的生长。抑制真菌活性试验发现对马铃薯干腐菌、番茄早疫菌和玉米弯孢菌有抑制作用。研究还证明甘草根瘤菌N003的发酵液在发酵96h时各项活性最强,此时的根瘤菌处于生长旺期,各类代谢活动旺盛,产生的次生代谢产物多。试验利用硅胶柱层析、葡聚糖凝胶LH-20柱层析、RP-18柱层析等手段,从甘草根瘤菌N003发酵物中分离得到3个化合物L-1、L-2、L-3,并借助质谱（EI-MS, FAB-MS）、氢谱（1H-NMR）、碳谱（13C-NMR）等现代波谱技术,以及与标准化合物对照,确定化合物结构分别为麦角甾-4,6,8（14）,22-四烯-3-酮（L-1）、过氧化麦角甾醇（L-2）、环（脯氨酸-酪氨酸）（L-3）。这3个化合物均为首次从甘草根瘤菌中分离得到。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 甘草的研究概况
• 1.1.1 甘草简介
• 1.1.2 甘草化学成分研究概况
• 1.1.3 甘草的药理作用
• 1.2 根瘤菌的研究概况
• 1.2.1 植物内生菌的研究
• 1.2.2 根瘤菌的相关研究
• 1.2.3 根瘤菌次生代谢产物
• 1.2.4 甘草根瘤菌的研究
• 1.3 本研究的目的与意义
• 第二章 甘草根瘤菌N003 发酵液生物活性研究
• 2.1 仪器与材料
• 2.1.1 仪器
• 2.1.2 材料
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 种液制备
• 2.2.2 扩大培养
• 2.2.3 抽滤保存
• 2.2.4 化感试验
• 2.2.5 真菌的抑制试验
• 2.2.6 细菌的抑制试验
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 数理统计分析方法
• 2.3.2 甘草根瘤菌发酵液的化感作用研究
• 2.3.3 甘草根瘤菌发酵液对真菌生长的影响
• 2.3.4 甘草根瘤菌发酵液对细菌生长的影响
• 2.4 讨论
• 第三章 甘草根瘤菌N003 发酵液化学成分研究
• 3.1 材料
• 3.1.1 试剂
• 3.1.2 仪器
• 3.2 试验方法
• 3.2.1 根瘤菌的发酵培养
• 3.2.2 萃取物的化学定性鉴定
• 3.2.3 乙酸乙酯萃取物的分离纯化
• 3.3 化合物的纯度鉴定
• 3.4 化合物的结构鉴定
• 3.4.1 化合物L-1 的结构鉴定
• 3.4.2 化合物L-2 的结构鉴定
• 3.4.3 化合物L-3 的结构鉴定
• 3.5 讨论
• 3.5.1 发酵条件探索
• 3.5.2 发酵产物分析
• 3.5.3 化合物的活性测定
• 第四章 结论
• 4.1 发酵液的活性
• 4.2 最佳发酵时间
• 4.3 次生代谢产物研究
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 作者简介