论文摘要
rSP3111基因是本试验室筛选鉴定的一种精源性表达基因。rSP3111蛋白最初被发现在大鼠精子中表达,并定位于精子顶体,命名为大鼠精子特异性表达蛋白(rat spermprotein 3111,rSP3111)。通过GenBank Blast等生物信息学分析,我们对rSP3111蛋白的结构进行了初步研究,结果表明rSP3111蛋白是具有一个四次跨膜结构的膜蛋白,这提示它可能与精卵间识别及结合有关。为进一步研究其细胞定位,我们构建了rSP3111蛋白与红色荧光蛋白DsRed融合表达的质粒,进而检测分析了该融合蛋白在体外培养的前列腺问质细胞膜及细胞质中的表达及其定位。其后,应用免疫荧光及共聚焦技术,我们对rSP3111蛋白在睾丸组织、附睾精子、卵及早胚卵裂球中的表达定位进行了分析,发现其分别分布在精子顶体部位、卵细胞膜及受精卵膜上,确定其为配子特异性表达膜蛋白。采用精子抗体封闭后体外受精试验,我们初步研究了rSP3111蛋白在受精及早胚发育过程中的作用,结果发现抗rSP3111特异性抗体Ab2438封闭精子及受精卵能降低正常受精率、导致高“卵割”卵率。为了观察rSP3111蛋白过量表达对受精及胚胎发育过程的影响,我们构建了在哺乳动物细胞中能表达的rSP3111表达质粒,以脂质体介导质粒转染睾丸内生殖细胞,转染后的细胞在附睾内生成精子,为我们进一步研究rSP3111蛋白在精子形成及精卵识别中的作用奠定了基础。综合以上研究结果,提示rSP3111在小鼠受精及早胚发育过程中起着重要作用,该蛋白可能是免疫性不孕的靶抗原及新型抗生育技术的潜在靶分子,其在受精及早胚发育中的作用机制值得我们进一步深入研究。