论文摘要
本文主要对微生物Absidia sp.R9g产芦丁-α-鼠李糖昔酶、Absidiasp.G3g产人参皂苷-α-鼠李糖苷酶和Absidi sp.E9r产淫羊藿苷糖苷酶分别进行分离纯化,以及对三种提纯酶的分子量确定、酶性质、酶反应特性等方面进行了研究。三种发酵粗酶液经DEAE-Cellulose DE52柱梯度洗脱得到提纯酶,提纯酶用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行了纯度检测及蛋白分子量测定,确定芦丁-α-鼠李糖苷酶、人参皂苷-α-鼠李糖苷酶和淫羊藿苷糖苷酶酶蛋白的分子量分别为:66kDa、58kDa、65kDa。对三种提纯酶的酶性质研究表明:芦丁-α-鼠李糖苷酶的最适反应条件为:pH5.0,在pH3.0～7.0区域范围内较稳定;最适温度50℃,30℃～60℃温度稳定性较好;金属离子Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Zn2+对酶反应的影响不大,而Fe3+、Cu2+则有抑制作用;酶反应动力学研究,得到米氏方程:1/V=18.09/S+0.146,最大反应速度 Vmax=6.849mmol/L·h,米氏常数 Km=123.904mmol/L。人参皂苷-α-鼠李糖苷酶的最适反应条件为:pH5.0,在pH3.0～6.0区域范围内较稳定;最适温度50℃,30℃～60℃温度稳定性较好;金属离子Na+、K+、Mg2+、Ca2+对酶反应的影响不大,而Zn2+、Fe3+、Cu2+则有抑制作用;酶反应动力学研究,得到米氏方程:1/V=12.906/S+1.447,最大反应速度 Vmax=0.691 mmol/L·h,米氏常数 Km=8.918mmol/L。淫羊藿苷糖苷酶的最适反应条件为:pH4.0,在pH3.0～6.0区域范围内较稳定;最适温度50℃,30℃～60℃温度稳定性较好;金属离子Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Zn2+对酶反应的影响不大,而Fe3+、Cu2+则有抑制作用;酶反应动力学研究,得到米氏方程:1/V=19.452/S+0.332,最大反应速度 Vmax=3.012mmol/L·h,米氏常数 Km=58.59mmol/L。对三种提纯酶的酶反应特性的研究表明:芦丁-α-鼠李糖苷酶能水解芦丁、橙皮苷、柚皮苷的α-鼠李糖基;人参皂苷-α-鼠李糖苷酶只水解人参皂苷Re的C-6位末端上的一个α-鼠李糖基;而淫羊藿苷糖苷酶能够水解葡萄糖基。
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摘要Abstract第一章 文献综述1.1 天然糖苷类化合物的研究1.1.1 天然糖苷类化合物的研究意义1.1.2 糖苷酶的研究进展1.1.3 糖苷酶在天然糖苷类化合物改造中的应用1.2 芦丁、异槲皮苷及芦丁-α-鼠李糖苷酶的研究现状1.2.1 芦丁、异槲皮苷的来源及理化性质1.2.2 芦丁、异槲皮苷的化学结构及药效作用1.2.2.1 芦丁、异槲皮苷的化学结构1.2.2.2 芦丁、异槲皮苷的药效作用1.2.3 芦丁-α-鼠李糖苷酶水解芦丁生成异槲皮苷的化学反应1的研究现状'>1.3 人参皂苷Re、Rg1的研究现状1.3.1 人参皂苷的来源及理化性1.3.1.1 人参皂苷的来源1.3.1.2 人参皂苷的理化性质1的化学结构'>1.3.2 人参皂苷Re、Rg1的化学结构1的药效作用'>1.3.3 人参皂苷Re、Rg1的药效作用1.3.3.1 人参皂苷Re的药理作用1的药理作用'>1.3.3.2 人参皂苷Rg1的药理作用1.3.4 人参皂苷-α-鼠李糖苷酶水解人参皂苷Re生成Rg1的化学反应1.4 淫羊藿苷及淫羊藿苷糖苷酶的研究现状1.4.1 淫羊藿苷的来源及理化性质1.4.2 淫羊藿苷的化学结构1.4.3 淫羊藿苷的药效作用1.4.3.1 对心脑血管系统的作用1.4.3.2 抗衰老作用1.4.3.3 抗肿瘤作用1.4.4 淫羊藿苷糖苷酶水解淫羊藿苷的化学反应1.5 天然糖苷类化合物结构改造方面的研究进展1.6 本论文的主要研究内容第二章 材料与方法2.1 实验材料2.1.1 菌种2.1.2 试剂与仪器2.1.2.1 试剂2.1.2.2 仪器2.2 实验方法2.2.1 菌种的液体培养2.2.1.1 芦丁液体发酵培养基的制备2.2.1.2 芦丁-α-鼠李糖苷酶发酵方法与粗酶液提取2.2.1.3 芦丁-α-鼠李糖苷酶酶活力的测定方法2.2.1.4 人参皂苷-α-鼠李糖苷酶液体发酵培养基的制备2.2.1.5 人参皂苷-α-鼠李糖苷酶的发酵方法与粗酶液提取2.2.1.6 人参皂苷-α-鼠李糖苷酶酶活力的测定方法2.2.1.7 淫羊藿液体发酵培养基的制备2.2.1.8 淫羊藿苷糖苷酶的发酵方法与粗酶液提取2.2.1.9 淫羊藿苷糖苷酶酶活力测定方法2.2.2 薄层层析法（TLC）分离样品2.2.2.1 薄层层析的操作2.2.3 芦丁-α-鼠李糖苷酶、人参皂苷-α-鼠李糖苷酶及淫羊藿苷糖苷酶的提纯分离2.2.3.1 离子交换层析纯化粗酶液2.2.4 SDS-PAGE测定芦丁-α-鼠李糖苷酶、人参皂苷-α-鼠李糖苷酶及淫羊藿苷糖苷酶的蛋白的分子量2.2.5 芦丁-α-鼠李糖苷酶、人参皂苷-α-鼠李糖苷酶及淫羊藿苷糖苷酶的酶性质研究2.2.6 芦丁-α-鼠李糖苷酶、人参皂苷-α-鼠李糖苷酶及淫羊藿苷糖苷酶反应特性的研究2.2.6.1 芦丁-α-鼠李糖苷酶、人参皂苷-α-鼠李糖苷酶及淫羊藿苷糖苷酶对黄酮类物质的反应特性的研究2.2.6.2 芦丁-α-鼠李糖苷酶、人参皂苷-α-鼠李糖苷酶及淫羊藿苷糖苷酶对皂苷类物质的反应特性的研究2.2.6.3 以对硝基酚-β-（α）-D-半乳糖苷（pNPGAL）、对硝基酚-β（α）-D-葡萄糖苷（pNPGLU）、对硝基酚-α-鼠李糖苷（pNPR）为底物测定酶反应专一性2.2.6.4 芦丁-α-鼠李糖苷酶、人参皂苷-α-鼠李糖苷酶及淫羊藿苷糖苷酶的淀粉酶活力的测定第三章 结果与讨论3.1 芦丁-α-鼠李糖苷酶的分离纯化及分子量测定3.1.1 芦丁-α-鼠李糖苷酶的制备及提纯3.1.2 芦丁-α-鼠李糖苷酶的纯度检测及分子量测定3.2 芦丁-α-鼠李糖苷酶性质的研究3.2.1 酶反应的最适pH值3.2.2 酶的pH稳定性3.2.3 酶反应的最适温度3.2.4 酶的温度稳定性3.2.5 金属离子对芦丁-α-鼠李糖苷酶的影响3.2.6 芦丁-α-鼠李糖苷酶的米氏常数3.3 芦丁-α-鼠李糖苷酶反应特异性的研究3.3.1 芦丁-α-鼠李糖苷酶与黄酮类底物反应3.3.2 芦丁-α-鼠李糖苷酶与皂苷类物质的反应3.3.3 提纯酶的pNP-β-D-GAL、pNP-α-D-GAL、pNP-β-D-GLU、pNP-α-D-GLU、pNPR酶活性检测3.3.4 芦丁-α-鼠李糖苷酶的淀粉酶活力的测定3.4 人参皂苷-α-鼠李糖苷酶的分离纯化及分子量测定3.4.1 人参皂苷-α-鼠李糖苷酶的制备及提纯3.4.2 人参皂苷-α-鼠李糖苷酶的纯度检测及分子量测定3.5 人参皂苷-α-鼠李糖苷酶的酶性质研究3.5.1 酶反应的最适pH值3.5.2 酶的pH稳定性3.5.3 酶反应的最适温度3.5.4 酶的温度稳定性3.5.5 金属离子对人参皂苷-α-鼠李糖苷酶的影响3.5.6 人参皂苷-α-鼠李糖苷酶的米氏常数3.6 人参皂苷-α-鼠李糖苷酶的酶反应特异性的研究3.6.1 人参皂苷-α-鼠李糖苷酶与黄酮类物质的反应3.6.2 人参皂苷-α-鼠李糖苷酶与皂苷类物质的反应3.6.3 提纯酶的pNP-β-D-GAL、pNP-α-D-GAL、pNP-β-D-GLU、pNP-α-D-GLU、pNPR酶活性检测3.6.4 淀粉酶活力的测定3.7 淫羊藿苷糖苷酶的分离纯化及分子量测定3.7.1 淫羊藿苷糖苷酶的制备及提纯3.7.2 淫羊藿苷糖苷酶的纯度检测及分子量测定3.8 淫羊藿苷糖苷酶的酶性质研究3.8.1 酶反应的最适pH值3.8.2 酶的pH稳定性3.8.3 酶反应的最适温度3.8.4 酶的温度稳定性3.8.5 金属离子对淫羊藿苷糖苷酶的影响3.8.6 淫羊藿苷糖苷酶的米氏常数3.9 淫羊藿苷糖苷酶的酶反应特异性的研究3.9.1 淫羊藿苷与黄酮类物质的反应3.9.2 淫羊藿苷糖苷酶与皂苷类物质的反应3.9.3 提纯酶的pNP-β-D-GAL、pNP-α-D-GAL、pNP-β-D-GLU、pNP-α-D-GLU、pNPR酶活性检测3.9.4 淀粉酶活力的测定3.10 三种酶反应特异性的综合讨论第四章 结论参考文献致谢
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