论文摘要
[背景]特发性肺间质纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis, IPF）迄今为止病因和发病机制不明确,但各种原因损伤后的异常修复在IPF发病机制中被认为具有决定性作用,而在损伤修复过程中,炎症反应占有一定地位。Th细胞是参与炎症反应的细胞成分,既往认为Th1/Th2平衡失调在肺纤维化的进程中具有重要的作用。自Treg细胞和Th17细胞被发现以来,Th17、Treg细胞被认为可能与Th1/Th2细胞一样参与了IPF的发生和发展。鉴于Th1、Th2、Th17细胞以及Treg细胞均为CD4+T细胞,而且它们之间相互作用,相互抑制,形成一个非常复杂的网络,因此Th细胞亚群在IPF中的作用有必要进一步研究。[目的]本研究拟探讨辅助性T细胞亚群在IPF患者外周血和支气管肺泡灌洗液中的分布、Th亚群各自的特异性转录因子在外周血中的表达状况、以及各亚群对PHA或rIL-2刺激的反应,初步探讨Th细胞在IPF的作用及其意义。[方法]收集IPF患者及对照组空腹外周静脉血及肺泡灌洗液；对外周血、肺泡灌洗液淋巴细胞进行刺激、培养以及胞内外标记,应用流式细胞仪（FCM）检测Th1、Th2、Th17以及Treg细胞比例,分析Th细胞亚群与IPF的关系；应用RT-PCR测定Th细胞亚群各特异性转录因子的表达;分离外周血血浆,应用ELISA法检测不同Th细胞亚群相关细胞因子浓度；同时对PBMC、CD4+CD25-T以及Treg细胞在不同培养基（自体血浆培养基vs胎牛血清培养基）中分别进行培养,应用PHA或rIL-2刺激后测定培养上清液中相关细胞因子浓度,进一步评价Th细胞在IPF中的功能状况。各组实验数据以均数±标准差（x±s）表示；应用SPSS17.0统计软件进行分析。对呈正态分布、方差齐的数据,两组间比较采用独立样本t检验,相关分析采用Pearson相关检验；非正态分布、方差不齐的数据,两组间比较采用Mann-whitney U检验,相关分析采用Spearman相关检验；P<0.05差异有统计学意义。[结果]1.在外周血中与对照组相比,IPF组Th1、Treg细胞的比例降低（p值分别为0.009、0.001）；Th17细胞的比例升高（p=0.004）,而Th2细胞的比例,两组差异无统计学意义（p=0.075）；2.外周血Treg细胞的比例与肺功能参数（FVC、TLC、DLCO）呈正相关；3.在肺泡灌洗液中与对照组相比,IPF患者Treg细胞的比例降低（p=0.019）；其余Th细胞亚群之间的差异无统计学意义；4.与对照组相比,IPF组PBMC中T-bet、FOXP3的表达明显降低（p值均小于0.001）；RORc的表达IPF组升高,但是差异无统计学意义（p=0.09）;GATA-3的表达两组之间差异无统计学意义（p=0.898）; PBMC中T-bet、GATA-3、FOXP3的表达与外周血中相应的细胞亚群的比例一致；T-bet的表达与Thl细胞比例呈正相关、FOXP3的表达与Treg细胞比例呈正相关；5.与对照组相比,IPF组血浆中IFN-γ和IL-10的浓度降低（p值分别为0.010、0.001）,IL-17A的浓度升高（p=0.011）；但IPF组血浆IL-4的浓度与对照组之间的差异无统计学意义（p=0.090）；6.对PBMC、CD4+CD25-T细胞在不同培养基的培养中,应用PHA刺激后胎牛血清培养基中IFN-γ或IL-17A的浓度均较自体血浆培养基明显升高,而IL-4的浓度虽有升高,但差异无统计学意义。7.应用rIL-2刺激后,与对照组比较,IPF组的Treg细胞分泌IL-10的能力明显降低（p<0.001）。[结论11.Th细胞在IPF发病中可能具有重要地位,Th1细胞及其分泌的IFN-γ、Treg细胞及其分泌的IL-10可能对IPF有保护作用；Th2细胞及其分泌的IL-4在肺纤维化中的作用有待进一步研究；Th17细胞及IL-17A可能参与了IPF的发病；2.与对照组相比,IPF组PBMC中T-bet、FOXP3的表达明显下降是决定Th1、Treg细胞在IPF中比例降低的主要因素;在IPF组RORc的表达升高可能部分决定了Th17在IPF中的分化；3.在外周血中与对照组相比,IPF组Th1、Th2及Th17细胞本身的分泌功能没有明显差别；血浆中IFN-γ、IL-4以及IL-17A浓度在两组中的差异可能主要与血浆中抑制因素的强弱有关。4.与对照组相比,IPF组Treg细胞比例降低,分泌IL-10的功能减低；Treg细胞比例降低及功能障碍可能参与IPF的发病,针对Treg细胞的治疗措施可能为IPF的治疗带来新的希望。
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标签：特发性肺间质纤维化论文; 细胞论文;