Dnmt1基因在小鼠胚胎发生阶段的转录

论文摘要

正确的基因组印记（genomic imprinting）对哺乳动物个体的发育非常重要,而DNA甲基转移酶Dnmtl是维持哺乳动物基因组印记最重要的酶。Dnmtl基因转录的mRNA存在两种形式,即体细胞特异表达的Dnmtls和卵母细胞特异表达的Dnmtlo。前人曾经以几十枚胚胎为模板,通过RT-PCR技术发现该基因在动物胚胎发育早期即开始表达。本论文在此基础上,以小鼠为材料,将模板量降至单枚卵母细胞或胚胎,在优化PCR的各种条件后,以期建立正常胚胎Dnmtl基因的标准转录模式。实验同时分析了Dnmtl与持家基因hprt的转录,结果发现,Dnmtls的转录本不仅存在于卵母细胞（15h-post hCG）中,而且胚胎从原核到囊胚（118h-post hCG）的各个发育过程中,一直存在该类型的转录本,依次为卵母细胞100%（10/10）、原核甲期（20h-post hCG）30%（3/10）、原核晚期（30h-post hCG）20%（2/10）、2-C早期（35h-post hCG）70%（7/10）,从2-C晚期（50h-post hCG）开始,包括4-C（65h-post hCG）、8-C（75h-post hCG）、桑椹胚阶段（93h-post hCG）,直至囊胚阶段均为100%（10/10）;而Dnmtlo转录本仅存在于卵母细胞（100%,10/10）、原核早期（90%,9/10）和原核晚期（40%,4/10）胚胎中;hprt转录本在所检测的各阶段细胞或胚胎中均100%（10/10）存在。以10枚卵母细胞或胚胎为模板时发现,Dnmtls转录本的量从卵母细胞到原核早期逐渐减少,这种低水平一直维持到原核晚期,从2-C早期开始有所回升,并在之后的发育过程中保持增加的趋势;而Dnmtlo的转录本则仅存在于卵母细胞、原核早期和原核晚期的胚胎中,且水平呈下降趋势。结果表明卵母细胞中生成的Dnmtls转录本在受精后迅速降解,胚胎基因组从2-c早期开始转录Dnmtls;而卵母细胞中生成的Dnmtlo mRNA在受精后以较慢的速度降解,胚胎基因组不再转录Dnmtlo。本实验通过建立Dnmtl在正常小鼠胚胎发生过程中的转录模式对不通过巢式PCR等特殊途径而检测微量模板的方法进行了有益的尝试,对于今后其他相关的检测或研究具有一定参考意义。

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• Abstract
• 第一部分 文献综述
• 引言
• 1 基因组印记对个体发育及动物克隆的影响
• 1.1 基因组印记的相关定义及起源
• 1.2 基因组印记在个体发育过程中的抹除、建立与维持
• 1.3 印记基因及其表达调控
• 1.4 基因组印记相关研究的主要进展和意义
• 2 Dnmtl在基因组印记中的主要作用及研究现状
• 2.1 Dnmtl基因及其产物的结构和种类
• 2.2 Dnmtl基因表达模式及其编码蛋白在基因组印记中功能的研究现状
• 第二部分 实验
• 实验一 常规RT-PCR条件的建立
• 摘要
• 前言
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 实验二 小鼠胚胎发生过程中Dnmtl基因转录模式的建立
• 摘要
• 前言
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 参考文献
• 致谢