蝎毒对体外培养的人肝癌细胞（SMMC 7721）和Hela细胞株的抗肿瘤作用研究及机制探讨

论文摘要

恶性肿瘤是严重威胁人类生命安全的疾病之一。寻求高效低毒的抗肿瘤药物及治疗方法一直是科学界研究的热点。蝎毒是一种生物毒素,因其具有广泛的生理学效应而倍受关注。本文旨在研究蝎毒对体外培养的人肝癌细胞（SMMC 7721）以及Hela细胞株的杀伤作用,并对其作用机制进行探讨,将为抗肿瘤药物的开发及蝎毒抗肿瘤的临床应用提供实验依据。目的:检测蝎毒粗毒及其部分纯化组分对人肝癌细胞（SMMC 7721）以及Hela细胞株生长的抑制作用;对两种细胞株凋亡相关蛋白进行检测,以探讨蝎毒对其作用机制;验证两种肿瘤细胞对于蝎毒的敏感性。方法:分别用蝎毒粗毒以及蝎毒部分纯化组分按照浓度梯度对人肝癌细胞（SMMC 7721）以及Hela细胞作用24小时,然后用MTT法检测两种肿瘤细胞对蝎毒粗毒以及部分纯化组分的存活率;分别用Western Blotting以及免疫细胞化学的方法检测caspase-3以及bcl-2两种凋亡相关蛋白在蛋白水平的表达量。Western Blotting以Actin作为内参。用免疫荧光的方法验证两种肿瘤细胞对于蝎毒的敏感性。结果:1 MTT结果:（1.1）经蝎毒粗毒处理24小时,粗毒组人肝癌细胞（SMMC 7721）的存活率明显低于对照组（P<0.05）,并随着蝎毒粗毒浓度增大（0.28、0.70、1.4、2.8及5.6μg/ml）,作用时间延长（4h、8h、12h、24h）,肝癌细胞存活率逐渐降低,呈梯度变化。（1.2）经蝎毒部分纯化组分处理24小时,纯化组人肝癌细胞（SMMC 7721）的存活率明显低于对照组（P<0.05）,并随着蝎毒浓度增大（0.28、0.70、1.4、2.8及5.6μg/ml）,作用时间延长（4h、8h、12h、24h）,肝癌细胞存活率逐渐降低,呈梯度变化。（1.3）蝎毒部分纯化组分对于人肝癌细胞（SMMC 7721）的杀伤作用稍弱于粗毒组。（2.1）经蝎毒粗毒处理24小时,粗毒组Hela细胞的存活率在蝎毒浓度为0.28、0.70、1.4μg/ml时,与对照组无明显差异;在蝎毒浓度为2.8及5.6μg/ml时,低于对照组（P<0.05）,并随着作用时间延长（4h、8h、12h、24h）,在8小时后逐渐降低,呈梯度变化。（2.2）经蝎毒部分纯化组分（浓度为0.28、0.70、1.4、2.8及5.6μg/ml）处理的Hela细胞的存活率在24小时内,与对照组无明显差异。（2.3）Hela细胞对于蝎毒粗毒及其部分纯化产物的敏感性低于人肝癌细胞（SMMC 7721）。2 Western blotting结果:经过2.8μg/ml蝎毒粗毒处理4小时的人肝癌细胞（SMMC 7721）,促凋亡蛋白caspase-3的蛋白表达量增加;抑制凋亡蛋白bcl-2的蛋白表达量减少。3免疫细胞化学结果:经过2.8μg/ml蝎毒粗毒处理8小时的Hela细胞,促凋亡蛋白caspase-3的蛋白表达量增加;抑制凋亡蛋白bcl-2的蛋白表达量减少。4免疫荧光结果:经过标记荧光的蝎毒粗毒处理8小时的人肝癌细胞（SMMC 7721）以及Hela细胞,荧光显微镜下可见,人肝癌细胞（SMMC 7721）结合的荧光物质多于Hela细胞。结论:1.蝎毒粗毒及其部分纯化组分对人肝癌细胞（SMMC 7721）的生长具有明显的抑制作用。24小时内,随着蝎毒浓度增大（0.28、0.70、1.4、2.8及5.6μg/ml）,作用时间延长（4h、8h、12h、24h）,存活率逐渐降低。粗毒纯化物虽然分子量相对单一,但对人肝癌细胞（SMMC 7721）的杀伤作用稍弱于粗毒。2.当蝎毒粗毒浓度为2.8及5.6μg/ml,处理时间大于8小时,Hela细胞的存活率逐渐下降,但对蝎毒的敏感性显著低于SMMC 7721。3.可初步认为蝎毒抑制人肝癌细胞（SMMC 7721）以及Hela细胞的生长可能是通过诱导细胞发生凋亡来实现的。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料和方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢