论文摘要
目的 采用细胞培养加入谷氨酸的方法造成PC12细胞兴奋毒性损伤模型,研究兴奋性毒性损伤后细胞存活率、自由基生成、细胞内游离钙含量及相关蛋白calpainⅡ、caspase-3和Aβ表达的变化,并探讨人参皂苷Rg2对谷氨酸诱导的PC12细胞毒性损伤的干预机制。 方法 利用PC12细胞株,采用细胞培养的方法,加入含1mmol/L谷氨酸的无血清培养基培养24h后即造成兴奋毒性损伤,给药组在损伤同时加入不同浓度的人参皂苷Rg2,并与药物尼莫地平（钙拮抗剂）进行对照。用生化方法测定MTT代谢率、NO（硝酸还原酶法）和MDA（硫酸巴比妥法）含量;Fura-2作为Ca2+指示剂,利用荧光分光光度计测定细胞内游离钙含量;免疫细胞化学方法检测PC12细胞内calpainⅡ、caspase-3及Aβ的表达。 结果 模型组PC12细胞MTT代谢率降低,上清液中NO、MDA含量增高,细胞内游离钙含量明显增加,calpainⅡ、caspase-3及Aβ表达增多,与正常组比较差异有统计学意义（P<0.05）。人参皂苷Rg2可使PC12细胞MTT代谢率增高,NO、MDA产生减少,明显降低细胞内游离钙含量,calpainⅡ、caspase-3及Aβ表达也相应减少,与模型组比较差别有统计学意义（P<0.05）,并且高剂量（0.2mmol/L）的人参皂苷Rg2保护作用明显优于低（0.05mmol/L）、中剂量（0.1mmol/L）组,作用呈现剂量依赖性。 结论 谷氨酸毒性损伤后,PC12细胞MTT代谢率降低,并引起细胞内钙内流增多,而导致细胞内钙超载,诱导calpainⅡ的过度表达;同时NO、MDA等自由基产生增多;激活caspase-3,由此引起淀粉样前体蛋白APP的异常裂解,造成淀粉样蛋白Aβ的生成增多。人参皂苷Rg2能改善谷氨酸损伤后PC12细胞的代谢能力、并有效的阻滞钙内流,防止钙超载,减少自由基的产生及其毒性作用,调控calpainⅡ及caspase-3的表达,减轻毒性损伤,并可通过阻断APP异常裂解的通路,使Aβ的生成减少,发挥其保护作用。
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