紫杉醇PLGA口服纳米粒的制备及生物利用度的研究

论文摘要

紫杉醇（Paclitaxel,TAX）是抗肿瘤药物,在临床上已得到广泛应用,特别是对乳腺癌、卵巢癌的治疗作用明显。由于其水溶性差,临床使用的紫杉醇注射液中的紫杉醇是靠聚氧乙烯蓖麻油（CremophorEL）与无水乙醇以1:1的混合液来稳定和溶解。但聚氧乙烯蓖麻油可促进组胺释放,常引起严重的过敏反应和其他不良反应。为了解决上述问题,研究不含Cremophor EL并能提高紫杉醇生物利用度的制剂成为当前的热点。把紫杉醇制备成口服纳米给药系统后,则不仅能减少毒副作用,增加其稳定性,而且方便储存和运输。本文制备了紫杉醇纳米粒（TAX-NPs）,优化了其处方和制备工艺,并对其进行了体内外评价。主要内容和结果如下:1.建立了紫杉醇样品HPLC测定方法,并对其线性范围、精密度、回收率等进行了验证,结果表明该方法符合分析要求。以生物可降解聚合物——聚丙交酯乙交酯共聚物（PLGA）为载体,采用乳化-分散法制备了TAX-NPs;以纳米粒的粒径和包封率为评价指标,考察了处方及其工艺因素对制剂质量的影响;对TAX-NPs的基本性质,体外稳定性和释药特征进行了考察;用差示扫描量热法（DSC）及X射线粉末衍射（XRD）分析了紫杉醇在纳米粒中的存在状态,TAX-NPs的平均粒径为（99±7.6）nm,Zeta电位为（78.3±5.87）mV,包封率和载药量分别为（56.99±0.29）%和（7.04±0.13）%。冻干TAX-NPs在4℃放置6个月稳定性良好。DSC及XRD表明TAX以分子形态被有效地包裹在纳米粒中。TAX-NPs在两种不同的pH值PBS释放介质中进行体外释放,以模拟生物体内环境,在pH值越低的条件下,药物释放越快,这对于载药纳米粒在偏酸性的肿瘤环境下发挥抗肿瘤作用非常有利。2.研究Caco-2细胞对纳米粒的摄取及其影响因素,以评价此种纳米粒作为口服抗肿瘤药物载体的可行性。通过包裹疏水性荧光探针香豆素-6（Coumarin-6,Cou-6）标记纳米粒,采用荧光酶标仪检测细胞内Cou-6的荧光强度,研究粒径,、孵育时间,、纳米粒浓度,、纳米粒的表面性质对Caco-2细胞摄取纳米粒的影响。采用激光共聚焦显微镜观察Caco-2细胞对纳米粒的摄取。与聚乙烯醇（Polyvinyl alcohol,PVA）做乳化剂制备的纳米粒相比,双十二烷基二甲基溴化铵（Didodecyldimethyl ammonium bromide,DMAB）作为乳化剂制备的纳米粒显著增加了Caco-2细胞对纳米粒的摄取率,细胞对粒径为100 nm左右的纳米粒的摄取率最高。结果证明纳米粒可经胃肠道给药吸收入血。3.利用大鼠在体肠吸收动力学实验,研究了紫杉醇纳米粒及其原料药在肠道的吸收情况,吸收动力学方程分别为:紫杉醇纳米粒lnX剩余=lnX0-0.154×t;紫杉醇原料药:lnX剩余=lnX0-0.0023×t,相关系数r分别为0.9460和0.9102。二者的吸收具有显著性差异（P＜0.05）,紫杉醇纳米粒在小肠中的吸收速率常数明显大于紫杉醇原料药。4.建立了紫杉醇的血药浓度测定方法。色谱条件为:色谱柱:Diamonsil C18柱（250mm×4.6mm,5μm）;流动相:乙腈/水（47:53,v/v）;柱温:30℃;检测波长:227nm;流速:1.0ml/min;进样量:20μl。高、中、低浓度回收率分别为91.23%、92.68%、89.38%。日内RSD分别为3.81%、3.49%、2.89%,日间RSD分别为5.12%、4.59%、3.48%。最低定量浓度为0.02μg/ml。所建立方法适合紫杉醇血药浓度的测定。以健康的SD大鼠为受试对象,紫杉醇注射液为参比制剂,采用随机对照方法,研究纳米粒在动物体内的生物利用度。实验结果表明紫杉醇纳米粒绝对生物利用度为19.5%,说明用纳米载药系统传输紫杉醇促进了紫杉醇的吸收,提高了其口服生物利用度。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.抗肿瘤药物紫杉醇的研究
• 1.1 历史与现状
• 1.2 紫杉醇的抗癌机理
• 1.3 紫杉醇制剂研究进展
• 1.4 临床应用
• 2.纳米粒给药系统
• 2.1 纳米粒用作药物载体的显著优点
• 2.2 纳米粒的种类
• 2.3.纳米粒的制备方法
• 2.4 纳米粒在医药领域中的应用
• 3.本课题的立题依据及研究意义
• 参考文献
• 第二章 紫杉醇口服纳米粒的制备及特性研究
• 1 材料与仪器
• 1.1 材料
• 1.2 仪器
• 2 实验方法
• 2.1 TAX的基本性质
• 2.2 体外分析方法的确立
• 2.2.1 检测波长的选择
• 2.2.2 色谱条件
• 2.2.3 标准曲线的制备
• 2.2.4 精密度
• 2.2.5 最低检出限与最低定量限
• 2.3 TAX-NPs的制备
• 2.4 冷冻干燥工艺考察
• 2.5 纳米粒的载药量与包封率的测定
• 2.5.1 测定方法
• 2.5.2 液相色谱系统的可行性验证
• 2.5.3 方法回收率
• 2.6 正交设计
• 2.6.1 单因素实验
• 2.6.2 正交优化设计
• 2.6.3 最优处方工艺验证
• 2.7 TAX-NPs的基本性质考察
• 2.7.1 形态观察
• 2.7.2 粒径和Zeta电位测定
• 2.7.3 包封率与载药量的测定
• 2.7.4 X-射线粉末衍射分析
• 2.7.5 差示扫描量热法分析
• 2.8 TAX-NPs体外稳定性考察
• 2.9 TAX-NPs体外释药特征考察
• 3 结果与讨论
• 3.1 体外分析方法的确立
• 3.1.1 检测波长的选择
• 3.1.2 标准曲线的制备
• 3.1.3 精密度
• 3.2 冷冻干燥工艺考察
• 3.2.1 添加剂种类的影响
• 3.2.2 添加剂浓度的影响
• 3.3 纳米粒的载药量与包封率的测定
• 3.3.1 液相色谱系统的可行性验证
• 3.3.2 方法回收率
• 3.4 正交优化设计
• 3.4.1 单因素实验
• 3.4.2 正交优化设计
• 3.4.3 最优处方工艺验证
• 3.4 TAX-NPs的基本性质
• 3.4.1 TAX-NPs的粒径、Zeta电位与形态
• 3.4.2 包封率与载药量的测定
• 3.4.3 X-射线粉末衍射（X-）分析
• 3.4.4 差示扫描量热法分析
• 3.4.5 TAX-NPs体外稳定性考察
• 3.4.6 TAX-NPs体外释药特征考察
• 4 本章小结
• 第三章 Caco-2细胞对纳米粒的摄取研究
• 1 材料与仪器
• 1.1 材料
• 1.2 仪器
• 2 实验方法
• 2.1 Cou-6-PLGA-NPs的制备
• 2.2 Caco-2细胞的培养
• 2.3 细胞对纳米粒的摄取
• 2.4 激光共聚焦扫描显微镜
• 3 结果与讨论
• 3.1 细胞对纳米粒的摄取研究
• 3.2 激光扫描共聚焦
• 4 本章小结
• 第四章 紫杉醇纳米粒大鼠在体肠吸收试验研究
• 1 材料与仪器
• 1.1 材料
• 1.2 仪器
• 2 实验方法
• 2.1 供试液与酚红液的配制
• 2.2 剂量的选择
• 2.3 肠循环液中酚红浓度的测定
• 2.4 肠循环液中紫杉醇的含量测定
• 2.5 在体肠吸收试验影响因素
• 2.6 在体肠吸收试验
• 3 结果与讨论
• 3.1 酚红标准曲线的制备
• 3.2 液相色谱系统的可行性验证
• 3.3 在体肠吸收试验
• 4 本章小结
• 第五章 紫杉醇口服纳米粒大鼠体内生物利用度研究
• 1 材料与仪器
• 1.1 材料
• 1.2 仪器
• 2 实验方法
• 2.1 血浆中紫杉醇测定方法的建立
• 2.1.1 色谱条件
• 2.1.2 标准溶液的配制
• 2.1.3 血样供试品的处理
• 2.1.4 方法专属性考察
• 2.1.5 标准曲线的制备
• 2.1.6 精密度试验
• 2.1.7 提取回收率试验
• 2.1.8 稳定性试验
• 2.2 大鼠体内生物利用度研究
• 3 结果与讨论
• 3.1 血浆中紫杉醇测定方法的建立
• 3.1.1 方法专属性考察
• 3.1.2 标准曲线和线性范围
• 3.1.3 精密度
• 3.1.4 提取回收率
• 3.1.5 稳定性
• 3.2 大鼠体内生物利用度研究
• 4 本章小结
• 全文总结
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的相关论文目录