IQGAP1蛋白通过提高细胞运动能力促进肝细胞癌侵袭转移

论文摘要

目的：研究肝细胞癌（HCC）组织中IQGAP1的表达情况与HCC临床病理特征以及随访预后的关系，探讨IQGAP1在HCC侵袭转移中的作用机制。 材料与方法：收集36例新鲜HCC标本以及112例HCC石蜡标本，所有标本按取材部位分为HCC组织和癌旁肝组织。将HCC组织标本均切成5微米厚的切片，HE染色观察肿瘤镜下微血管侵犯、肿瘤包膜完整性、肝硬化程度、肿瘤细胞分化程度等临床病理特征。按肿瘤结节数目及肿瘤直径将HCC标本分为三组：孤立性大肝癌组（指单个结节且肿瘤直径＞5厘米，SLHCC），小肝癌组（指单个结节或两个结节，肿瘤直径之和≤5cm，SHCC），结节性肝癌组（指肿瘤结节≥2个，两个结节且直径之和≤5厘米者除外，NHCC）。采用半定量逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）检测IQGAP1 mRNA的表达，免疫组织化学SABC法及Western blot检测IQGAP1蛋白的表达。根据IQGAP1在HCC细胞中表达的部位，将IQGAP1免疫组化阳性染色的HCC标本分为IQGAP1胞膜表达型和IQGAP1胞浆表达型。比较IQGAP1在各组HCC中的表达水平、表达类型以及与HCC临床病理特征关系，分析IQGAP1表达与HCC手术预后的关系。采用具有不同侵袭转移能力的HepG2细胞株和CCL13细胞株检测IQGAP1蛋白表达的差异。通过IQGAP1小鼠抗人单克隆抗体阻断HepG2细胞株中IQGAP1蛋白的功能，并采用Transwell实验探讨IQGAP1蛋白促进HCC侵袭转移的作用机制。 结果：显微镜下观察HE染色的病理切片，结果显示81.1％

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料和方法
• 1 研究对象及材料
• 1.1 研究对象
• 1.2 实验设计与分组
• 1.3 病理资料
• 2 实验方法
• 2.1 用RT—PCR检测IQGAP1 mRNA
• 2.1.1 组织总RNA提取
• 2.1.2 细胞总RNA提取
• 2.1.3 cDNA合成
• 2.1.4 PCR扩增
• 2.2 免疫组化检测IQGAP1的表达
• 2.3 Wester blot检测IQGAP1的表达
• 2.4 CCL13和HepG2细胞的培养
• 2.5 细胞电穿孔法导入单克隆抗体阻断IQGAP1
• 2.6 体外细胞运动能力检测
• 2.7 体外细胞侵袭能力检测
• 3 随访
• 4 统计学方法
• 实验结果
• 1 NHCC、SLHCC和SHCC临床病理特征的比较
• 2 IQGAP1 mRNA在HCC组织中的表达
• 3 不同类型HCC的IQGAP1 mRNA的表达
• 4 IQGAP1 mRNA表达与HCC临床病理的关系
• 5 疫组化法检测HCC组织、癌旁肝组织以及正常肝脏中IQGAP1表达
• 6 Western blot法检测HCC和癌旁肝组织中IQGAP1蛋白的表达水平
• 7 IQGAP蛋白表达情况与HCC临床病理特征的关系
• 8 三组HCC的病人的生存情况比较
• 9 三组HCC中IQGAP1表达情况
• 10 IQGAP1表达情况与HCC手术预后的关系
• 11 单因素分析临床病理特征对HCC手术预后的影响
• 12 多因素分析HCC手术预后的风险因子
• 13 IQGAP1 mRNA和蛋白在HepG2和CCL13细胞的表达
• 14 阻断IQGAP1蛋白后对细胞运动能力影响
• 15 阻断IQGAP1蛋白后对细胞侵袭能力影响
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 攻读学位期间的主要成果