人参皂苷Rh2与Etoposide协同诱导Hela细胞凋亡的机制研究

论文摘要

肿瘤细胞对化疗药物的耐受性,以及化疗药物对正常组织的强毒性,常常导致化疗失败。药物联合应用策略能够减少药物使用剂量,减低毒性,协同增大药物效果,是克服肿瘤耐药的有效策略。在本研究中,我们首次发现人参皂苷Rh2与拓扑异构酶Ⅱ抑制剂Etoposide联合应用能够协同杀伤人宫颈癌HeLa细胞、人胃癌SGC-7901细胞、人肝癌HepG2细胞。以HeLa细胞为研究模型,我们发现:低剂量的G-Rh2（7.5μg /ml）能够显著增强Etoposide诱导HeLa细胞凋亡的能力,使HeLa细胞对Etoposide的敏感性大大加强。通过进一步对细胞凋亡信号转导通路的研究,我们发现G-Rh2与Etoposide通过线粒体途径协同诱导细胞凋亡,G-Rh2能够显著增强Etoposide诱导的HeLa细胞线粒体释放cytochrome c和Smac,深入研究发现,这些信号的放大是由于G-Rh2增强Etoposide诱导的HeLa细胞Bak、Bax由胞浆到线粒体膜的转位增多所导致。在机制研究中,我们还发现:低剂量的Etoposide由于释放Smac不足而诱导HeLa细胞凋亡受限,G-Rh2能够显著促进Etoposide诱导的HeLa细胞线粒体内Smac释放,从而增强Etoposide诱导细胞凋亡,并且是二者发生协同作用的关键原因。我们的发现为研究如何克服恶性肿瘤对Etoposide为代表的拓扑异构酶抑制剂的拮抗作用以及发现新的药物联合应用方案提供了理论基础,为抗肿瘤药物协同机制的研究提供了新的方法。

论文目录

• 提要
• 第一篇 前言
• 第一章 背景知识
• 第一节 抗肿瘤药物协同作用研究在恶性肿瘤治疗中的重要作用.
• 第二节 恶性肿瘤与细胞凋亡
• 第三节 细胞凋亡的基本理论
• 第四节 G-Rh2 的研究进展
• 第五节 Etoposide 的研究进展
• 第二章 论文的研究目的和设计思路
• 第一节 论文的研究目的
• 第二节 论文设计思路
• 第二篇 材料和方法
• 第一章 材料与试剂
• 一、细胞株
• 二、试剂
• 三、抗体
• 四、主要仪器
• 五、主要溶液
• 第二章 实验方法
• 一、细胞培养
• 二、药物溶解
• 三、MTT 比色法
• 四、流式细胞仪检测凋亡细胞百分比
• 五、DAPI 染色分析
• 六、体外Caspase 活力测定
• 七、MitoCapture 染色测线粒体膜电位
• 八、全细胞裂解液的制备
• 九、线粒体及胞浆蛋白质的分离和制备
• 十、BCA 法测定蛋白质浓度
• 十一、聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE Assay）
• 十二、免疫印迹分析
• 十三、RNA 干扰
• 第三篇 结果与讨论
• 第一章 G-Rh2 与Etoposide 联合作用效果研究
• 第一节 G-Rh2、Etoposide 单独作用对不同肿瘤细胞的杀伤效果
• 第二节 G-Rh2 和Etoposide 联合作用效果
• 第三节 本章小结
• 第二章 G-Rh2 与Etoposide 协同诱导HeLa 细胞凋亡的机制研究
• 第一节 G-Rh2 与Etoposide 协同诱导HeLa 细胞凋亡
• 第二节 G-Rh2 与 Etoposide 协同诱导 HeLa 细胞凋亡过程中caspase-8、-9 的激活情况
• 第三节 G-Rh2 与Etoposide 协同诱导HeLa 细胞凋亡过程中线粒体水平的变化
• 第四节 G-Rh2 与Etoposide 协同诱导HeLa 细胞凋亡过程中Bak、 Bax 的变化
• 第五节 Smac 在G-Rh2 与Etoposide 协同诱导HeLa 细胞凋亡过程中的关键作用
• 第六节 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 攻读博士学位期间发表论文
• 中文摘要
• 英文摘要
• 致谢
• 作者简介