论文题目: 软骨组织工程载体—关节软骨源性支架的系列研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 骨外科学
作者: 张建党
导师: 卢世璧
关键词: 软骨组织工程,支架,关节软骨脱细胞基质,关节软骨源性微载体,关节软骨源性海绵,胰酶
文献来源: 中国人民解放军军医进修学院
发表年度: 2005
论文摘要: 关节软骨损伤较为常见,而软骨自身修复能力极其有限。虽然软骨缺损的修复方法有很多种,如钻孔、微骨折技术、自体骨膜移植等,但都不尽如人意。随着组织工程的发展,利用组织工程软骨修复软骨缺损展示了诱人前景。理想的支架是组织工程成功构建的关键一环。目前,已有多种材料被制备成不同结构的支架,如PLGA、壳聚糖、藻酸盐和Ⅰ型胶原等,但是,从仿生学角度分析,这些材料均不具备细胞外基质的功能和作用,本身缺乏软骨细胞特定的细胞识别信号。因而,我们把方向逐渐转向了关节软骨基质。 我们首先建立了人关节软骨脱细胞基质的制备方法,简述如下:把关节软骨剪裁成一定大小的软骨块,冻干后对之进行如下脱细胞处理:①把关节软骨放入含蛋白酶抑制剂的低渗Tris-HCL(Ph7.4)缓冲液4℃持续振荡24h;②用1%Triton X-100、Tris-HCL液(V/V)内加蛋白酶抑制剂4℃持续振荡48h后取出,标本用蒸馏水彻底冲洗;③用DNase和RNase混合液37℃消化过夜;④重新置入1%Triton X-100、Tris-HCL液中,4℃洗脱24h,取出后用蒸馏水冲洗48h。结果显示细胞陷窝内已无细胞结构;番红花O染色阳性;软骨蛋白聚糖、Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性。结果证实:人关节软骨冻干后,经去污剂-酶等方法处理后可脱去软骨的细胞成分,并且保留了软骨细胞外基质,成功制备了人关节软骨脱细胞基质。但经压汞法检测,其孔隙率仅仅45%,过低,使用这种方法制备的材料作为软骨组织工程支架仍欠理想,需要进一步改进。 接着,我们建立了关节软骨源性微载体的制备方法,并成功制备出关节软骨源性微载体。方法简要如下:切取关节软骨,对之冷冻干燥后,经粉碎机粉碎,筛取200-150um大小的软骨粒,经0.25%胰酶在37℃消化24小时,再经1%的化学去污剂Triton X-100震荡72小时。结果发现:倒置显微镜下见软骨粒变为绒球状或毛刷状,H E染色显示已无软骨细胞,番红O染色弱阳性;软骨蛋白聚糖免疫组化染色阴性,Ⅱ型
论文目录:
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 人关节软骨脱细胞基质的制备
材料与方法
实验结果
讨论
结论
参考文献
附图一
第二部分 人关节软骨源性微载体的制备
材料与方法
实验结果
讨论
结论
参考文献
附图二
第三部分 关节软骨源性微载体与软骨细胞的体外相容性
材料和方法
实验结果
讨论
结论
参考文献
附图三
第四部分 关节软骨源性海绵的制备
材料和方法
实验结果
讨论
结论
参考文献
附图四
第五部分 关节软骨源性海绵同种异体移植的细胞免疫学
材料和方法
实验结果
讨论
结论
参考文献
附图五
第六部分 关节软骨源性海绵构建组织工程软骨修复兔膝全厚关节软骨缺损
材料和方法
实验结果
讨论
结论
参考文献
附图六
综述：去分化软骨细胞的再分化方法进展
缩略词表
攻读学位期间发表文章情况
致谢
发布时间: 2005-07-15
参考文献
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