论文题目: 吴茱萸碱与白细胞介素-1诱导人黑色素瘤A375-S2细胞死亡相关机制的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 药理学
作者: 王澈
导师: 王敏伟,池岛乔
关键词: 吴茱萸碱,细胞凋亡,家族,家族,家族
文献来源: 沈阳药科大学
发表年度: 2005
论文摘要: 本文对白细胞介素1β（IL-1β）诱导人黑色素瘤A375-S2细胞死亡的机制进行了较为系统的研究，并对吴茱萸碱诱导A375-S2细胞死亡的机制进行了更加深入的探讨，通过比较两者的相关机制对A375-S2细胞发生死亡的特异性进行了初步的阐述。 在IL-1β诱导A375-S2细胞死亡实验中，我们首先精制纯化重组人白细胞介素1β（rhIL-1β），并对A375-S2细胞进行亚克隆以筛选出对IL-1β高敏感的A3-75-S2细胞株。实验结果表明，IL-1β在体外能够明显地抑制A375-S2细胞的增殖；形态学和核荧光染色方法观察到，IL-1β作用后的细胞表现出部分凋亡特征；乳酸脱氢酶（LDH）活力测定和DNA片段化分析进一步肯定了IL-1β通过细胞凋亡途径诱导A375-S2细胞死亡。流式细胞分析发现，IL-1β还可将细胞周期阻滞在G0／G1期。进一步研究表明，caspase参与了IL-1β诱导A375-S2细胞的凋亡。caspase家族和caspase-1、-3、-8、-9、-10的抑制剂均能够部分抑制IL-1β诱导细胞凋亡的作用，caspase-1、-3、-8和-9的活力在IL-1β作用细胞后均明显增加。其中caspase-1被激活不仅参与caspase级联反应，还将内源性Pro-IL-1β活化成IL-1β，与外源性IL-1β发挥协同作用。caspase-3的激活可使其底物PARP（poly-（ADP-ribose）polymerase）和ICAD（inhibitor of caspase activated DNase）被降解。在线粒体途径中，IL-1β可使Bcl-2、Bcl-xL蛋白表达下降，而使Bax的表达水平升高，并可促进凋亡诱导因子（AIF）的释放。同时，IL-1β还激活了p53及其下游的p21，这与IL-1β引起的细胞周期阻滞以及Bax蛋白表达水平上调的作用密切相关。此外，在IL-1β诱导A375-S2细胞发生死亡过程中，p38激酶（p38）和c-Jun氮末端激酶（JNK）被激活，细胞外信号调节激酶（ERK）活力被抑制。提示ERK激酶在此过程中对细胞起保护作用，而p38和JNK激酶则起着促进作用。 在吴茱萸碱诱导A375-S2细胞死亡实验中，TUNEL检测法再次证实吴茱萸碱诱导的A375-S2细胞死亡在24h前以细胞凋亡为主。MTT法和形态学实验发现，磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）抑制剂和蛋白激酶C（PKC）家族抑制剂均增强了吴茱萸碱诱导的细胞死亡，吴茱萸碱能够降低PKC活力，在此过程中，PI3K抑制剂抑制了PKC的活力，而ERK抑制剂对PKC活力没有产生影响。并且，PI3K
论文目录:
中文摘要
ABSTRACT
缩略语
第一章 绪论
第一节 抗肿瘤药物研究进展
一 肿瘤的发生与特性
二 抗癌药物开发及其应用情况
第二节 肿瘤细胞的细胞凋亡及其分子机制研究进展
一 细胞凋亡的特征及生物学意义
二 细胞凋亡与肿瘤的关系
三 细胞凋亡的调控因素
1.caspase蛋白酶与细胞凋亡
2.Bcl-2家族成员在细胞凋亡中的作用
3.p53与细胞凋亡
3.1 p53对细胞周期的调节
3.2 p53对细胞凋亡的调节
4.Fas／FasL与细胞凋亡
5.其他细胞凋亡相关因素
5.1 Ras基因
5.2 c-Myc基因
5.3 SIRT1去乙酰化酶
四 细胞凋亡的信号转导途径
1.死亡受体途径
2.线粒体途径
3.PI3K-Akt／PKB信号转导途径
4.蛋白激酶C信号转导途径
5.MAPK信号转导途径
参考文献
第二章 IL-1β诱导人黑色素瘤A375-S2细胞死亡机制研究
第一节 恶性黑色素瘤的研究进展及治疗
第二节 IL-1的研究进展
一 IL-1的生物学功能
二 IL-1影响细胞增殖以及相关信号转导途径的研究近况
第三节 IL-1β诱导人黑色素瘤A375-S2细胞死亡机制研究
一 实验部分
1.实验材料
2.实验方法
二 实验结果
1.人重组IL-1β的精制及定量
1.1 IL-1β的精制过程中各蛋白质的确认
1.2 IL-1β浓度的确定
2.人黑色素瘤A375-S2细胞的亚克隆
3.A375-S2细胞对细胞因子敏感性的比较
4.IL-1β在体外对A375-S2细胞的抑制作用
5.polymyxin B(PB)对IL-1β诱导A375-S2细胞死亡的影响
6.IL-1β对A375-S2细胞形态学特征的影响
7.IL-1β对A375-S2细胞DNA降解的影响
8.乳酸脱氢酶活力测定
9.IL-1β诱导A375-S2细胞死亡时对细胞周期的影响
10.caspase家族成员在IL-1β诱导A375-S2细胞死亡过程中的作用
11.IL-1β诱导A375-S2细胞中内源性IL-1β的产生
12.IL-1β对A375-S2细胞内caspase-3底物PARP和ICAD表达的影响
13.IL-1β诱导A375-S2细胞凋亡时对线粒体途径的影响
14.IL-1β对A375-S2细胞内p53和p21蛋白的活化
15.MAPK家族成员在IL-1β诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的作用
三 讨论
四 结论
参考文献
第三章 吴茱萸碱诱导人黑色素瘤A375-S2细胞死亡机制研究
第一节 吴茱萸碱的研究进展
一 概述
二 吴茱萸碱的抗肿瘤活性
第二节 吴茱萸碱诱导人黑色素瘤A375-S2细胞死亡机制研究
一 实验部分
1.实验材料
2.实验方法
二 实验结果
1.吴茱萸碱在作用早期诱导A375-S2细胞凋亡
2.PI3K和PKC在吴茱萸碱诱导A375-S2细胞死亡中的作用
3.吴茱萸碱对PKC活力的影响
4.PI3K和PKC对ERK蛋白表达及其磷酸化的影响
5.吴茱萸碱对A375-S2细胞中SIRT1、p53和p21的影响
6.SIRT1的失活和p53的活化与PI3K／PKC／ERK途径的关系
7.Bax／Bcl-2的表达比率依赖于PI3K／PKC的调节
8.吴茱萸碱对Akt的影响
9.吴茱萸碱能够促进Fas配体(FasL)的表达
10.泛素化在吴茱萸碱诱导A375-S2细胞死亡中的作用
10.1 泛素化对A375-S2细胞中IκBα的磷酸化和降解的影响
10.2 泛素化对caspase-3的激活和Bcl-2的降解的影响
三 讨论
四 结论
参考文献
第四章 吴茱萸碱与IL-1β诱导A375-S2细胞死亡机制之间关系的探讨
一 实验部分
1.实验材料
2.实验方法
二 实验结果
1.IL-1Ra能够部分抑制吴茱萸碱诱导的A375-S2细胞死亡
2.IL-1Ra对吴茱萸碱诱导的PKC活力的下调的影响
3.IL-1Ra对p38 MAPK和ERK活力的影响
4.IL-1Ra对吴茱萸碱启动的死亡受体途径的影响
5.IL-1Ra对吴茱萸碱诱导的从DNA损伤、p53激活到Bax／Bcl-2比例上调的细胞死亡过程的影响
6.IL-1Ra对IκBα的磷酸化及降解的影响
三 讨论
四 结论
参考文献
致谢
附录
发布时间: 2006-11-27
参考文献
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