论文题目: 猪转化生长因子β1基因多态性与猪产仔数关系的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 动物遗传育种与繁殖学
作者: 武艳萍
导师: 王爱国,李宁
关键词: 产仔数,基因,单倍型,单倍型构成
文献来源: 中国农业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 转化生长因子β1(TGF-β1)是转化生长因子家族的重要成员,具有促进细胞生长、分化、迁移、免疫调节和细胞外间质(ECM)形成等作用。本研究以猪TGF-β1基因作为影响猪产仔数性状的候选基因,选用大白猪、长白猪、皮特兰猪、圣特西猪和二花脸猪为实验材料,利用单核苷酸构象多态性(single-strand conformation polymorphism,SSCP)方法对猪TGF-β1基因进行单核苷酸多态性的检测与分析,探讨其作为影响猪产仔数性状的候选基因的可能性。 首先利用本实验室构建的猪BAC文库TGF-β1阳性克隆测序获得第2外显子两端侧翼序列、第3外显子3’端、第5外显子3’端的侧翼序列,对TGF-β1基因cDNA序列和内含子4、内含子6进行了SSCP检测与分析,发现5个SNP:第四内含子32处(GenBank序列号:AF461809)C→T突变,第六内含子179处G→A突变、1043处C→T突变(GenBank序列号:AJ621785),和3’非翻译区2490和2494处G G→A A连锁突变(GenBank序列号:M23703)。将5个SNPs做单倍型处理后,群体中主要存在两种单倍型:CGCAA(记为A),和TATGG(记为K)。对不同猪种的单倍型频率统计发现,在大白猪、长白猪、皮特兰猪和圣特西猪中等引入猪种中,单倍型A为优势等位基因,在中国地方良种二花脸中,单倍型K为优势等位基因。建立线性模型:Y=u+场年季效应+TGF-β1单倍型构成效应+残差,估计各单倍型构成对大白猪产仔数的影响效应。结果显示以KK型的产仔数为最高。对三种单倍型构成的最小二乘均值进行两两t检验,KK型比AK型头胎总产仔数平均多产1.02头/胎,两者之间差异显著(P<0.05);KK型比从型多产0.49头/胎,但二者之间的差异不显著(P>0.1);从型比AK(型多产0.53头/胎,二者之间差异显著(P<0.1)。说明KK型对母猪头胎总产仔数有较大的影响。各单倍型构成对头胎产活仔数和二胎产仔数(包括总产和产活仔数)的影响差异不显著。对从型和AK型母猪断奶后第3天、妊娠第10天、15天、21天和70天的外周血血浆TGF-β1浓度检测结果显示:从型母猪断奶第3天的TGF-β1浓度显著高于妊娠第10、15、21和第70天(P<0.01),妊娠第10天的与妊娠第15天差异不显著,但显著高于妊娠第21天(P<0.01),妊娠第15天的TGF-β1浓度与妊娠第10天和第21天的差异都不显著。在另一种单倍型基因型AK型母猪中,也表现出类似的变化规律。从型和AK型母猪均以妊娠第70天的血浆TGF-β1浓度最低。AK型分别在5个采血日龄的血浆TGF-β1浓度均高于从型。对AA、AK(和KK型母猪妊娠第70天的TGF-β1浓度检测发现,KK型和AK型分别显著高于从型(P<0.01)。研究结果显示:TGF-β1基因对母猪产仔数有一定影响,单倍型构成KK是母猪产仔数优势基因型,杂合子AK型母猪产仔数最低。外周血TGF-β1浓度随母猪的生理周期而变化,不同单倍型构成在不同时期TGF-β1的表达量存在明显的差异,提示该因子在妊娠中具有重要作用。
论文目录:
第一章 文献综述
1.1 雌性生殖调控及母猪的繁殖特点
1.1.1 雌性生殖的内分泌调控
1.1.2 母猪的繁殖特点
1.2 转化生长因子-β1与妊娠
1.2.1 转化生长因子-β及其受体的生物学特点
1.2.2 TGF-β1的繁殖学效应
1.3 TGF-β1基因研究进展
1.4 本研究的目的和意义
第二章 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验动物和材料
2.1.2 菌株和克隆载体
2.1.3 药品和酶
2.1.4 主要仪器
2.1.5 溶液配制
2.1.6 引物的设计与合成
2.1.7 分析工具软件及网址
2.2 主要实验步骤
2.2.1 4D—两步快速PCR法筛选猪BAC文库
2.2.2 猪基因组DNA的提取
2.2.3 PCR-SSCP过程
2.2.4 PCR产物的回收纯化
2.2.5 连接反应
2.2.6 感受态细胞的制备
2.2.7 转化
2.2.8 筛选重组质粒
2.2.9 质粒DNA的小量快速提取(DAOPU试剂盒)
2.2.10 阳性克隆测序
2.2.11 双抗夹心ELISA检测猪血浆TGF-β1活性
第三章 结果与分析
3.1 从猪BAC文库筛选的目的克隆和测序结果
3.1.1 获得目的克隆
3.1.2 目的克隆测序结果
3.2 猪TGF-β1基因多态性检测
3.2.1 猪基因组提取结果
3.2.2 猪TGF-β1基因多态性检测
3.2.3 猪TGF-β1基因4个多态性位点突变前后的转录调控因子预测结果
3.2.4 TGF-β1 4个多态性位点的单倍型处理
3.3 猪TGF-β1基因单倍型构成与产仔数关系分析
3.3.1 各品种产仔数统计结果
3.3.2 单倍型构成与产仔数关系分析
3.4 不同单倍型构成母猪血浆TGF-β1浓度的变化
3.4.1 单倍型构成与血浆TGF-β1浓度的关系
3.4.2 母猪血浆中TGF-β1浓度的动态变化
第四章 结果与讨论
第五章 结论
参考文献
发布时间: 2005-07-18
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