论文摘要
本试验根据Bb的Flagellin gene基因和T+Pm的toxA基因分别设计了一对特异性引物（B1／B2和TOXA2／TOXA3），以构建AR多重PCR检测体系。结果显示该多重PCR具有非常高的特异性和敏感性。利用构建的多重PCR方法对广西10个县市猪场采来的353份鼻拭子进行检测，结果T+Pm PCR阳性数为110份，Bb PCR阳性数为59份。T+Pm和Bb不但从表现AR临床症状的猪体内检出，而且在不表现任何临床症状的猪体内也分离出该病原体，数据表明广西猪场感染T+Pm和Bb的情况十分普遍，且以局部地区爆发（崇左、玉林、陆川）和极大部分地区隐性感染为主。AR在广西范围内的分布情况：桂东南（贵港、玉林、陆川、博白）、南宁及周边县市（武鸣、扶绥、崇左）、桂北（柳州）、桂南（合浦）AR感染情况都比较严重，调查结果有助于猪场尽快采取措施净化AR。由此可见建立AR的T+Pm和Bb的多重PCR方法对广西进行流行病学调查，是非常必要的，对广西养猪业的发展具有重大的意义。OMPH是多杀性巴氏杆菌的主要外膜蛋白，OMPH在致病菌对宿主的感染和致病过程中起着重要的作用。试验另外设计引物OMPH3／OMPH4，成功地对广西8株Pm的OMPH基因进行了PCR扩增、克隆和测序。取其中OMPH基因的ORF核苷酸序列并推导其氨基酸序列，与GeneBank上公开发表的其它OMPH基因序列进行同源性比较和遗传进化树分析，结果显示：这8株广西Pm的OMPH基因可分为2个群：Ⅰ群和Ⅱ群，Ⅰ群包括：GXHP、GXCZ、GXLZ、GXFS、GXWM，GXNN，GXGG，GXYL单独为Ⅱ群。氨基酸残基中Ⅱ群的特异性变化位点有第45、46、82、83、85、91、101、182、188、218、223、258、272、322、324、326位。8株OMPH基因编码区核苷酸及推导的氨基酸序列同源性的比较结果都分别在90.9-100％之间，具有很高的同源性。通过分析结果以了解广西Pm的OMPH基因与其它毒株在遗传特点、进化规律上的关系，研究OMPH应用于疫苗的可行性，为研制更为有效的适合广西的新型疫苗打下良好的基础。