论文摘要
第一部分高钾减弱酮色林对表达在爪蟾卵母细胞上的Kv1.3通道的阻断作用和酮色林的体外免疫研究目的:研究酮色林（KT）对Kv1.3钾通道的药理学效应和不同浓度的胞外钾离子对通道动力学的影响,探索KT通过阻断Kv1.3通道潜在的免疫调节作用和在电解质紊乱条件下钾通道阻断剂阻断效应的变化。方法:Kv1.3钾通道表达在非洲爪蟾卵母细胞上,用双电极电压钳技术记录电流。结果:KT以浓度和时间依赖性、电压非依赖性的方式阻断Kv1.3通道电流,并加速Kv1.3通道电流的激活和失活。高钾以浓度依赖性的方式增加Kv1.3通道电流。高钾使Kv1.3通道电流的激活和失活曲线左移,并加速通道的激活和失活时间常数。高钾减弱KT对Kv1.3通道的阻断作用。在KT和氯化钾同时存在条件下,无论哪一种先施加,激活和失活时间常数没有受到显著影响。结论:KT通过结合于开放状态的Kv1.3通道阻断Kv1.3电流。KT对Kv1.3电流的阻断和高钾对Kv1.3电流幅度的增加可能与其免疫调节作用有关。高钾减弱KT对Kv1.3通道的阻断作用显示在电解质紊乱条件下,由于电解质对通道动力学的影响,离子通道阻断剂不能发挥最有效的治疗作用。第二部分胺碘酮对Kv1.3和Kv1.5通道电流的阻断和体外免疫调节作用目的:通过研究胺碘酮对体外表达的Kv1.3通道的作用及对体外激活的CD4+和CD8+T淋巴细胞的作用,以及对体外脂多糖激活的人外周血淋巴细胞分泌细胞因子的影响,以期阐明胺碘酮免疫调节的可能机制之一。通过对体外表达的Kv1.5通道的阻断作用,以期探讨胺碘酮抗房颤的可能机制及临床潜力。方法:使用双电极电压钳技术记录表达于非洲爪蟾卵母细胞的Kv1.3和Kv1.5钾通道电流,不同浓度胺碘酮灌流观察其对电流影响。胺碘酮作用于离子霉素（Ionomycin）和佛波酯（PMA）激活的人外周血淋巴细胞,双抗体标记后流式细胞仪测定CD3+CD4+T和CD3+CD8+T淋巴细胞百分比。胺碘酮作用于脂多糖（LPS）激活的人外周血淋巴细胞,用双抗体夹心ELASA法检测培养液上清中细胞因子IL-2、TNF-α、IL-10和TGF-β1的浓度。结果:（1）胺碘酮浓度依赖性的阻断Kv1.3通道,其阻断的IC50是3.43μM。胺碘酮对Kv1.3电流的阻断具有电压非依赖性。（2）胺碘酮对Kv1.5通道没有明显的阻断作用。（3）同正常组相比,激活对照组CD3+CD4+T和CD3+CD8+T淋巴细胞比例,CD3+CD4+/CD3+CD8+比值无显著差异（P>0.05）。同激活对照组相比,胺碘酮可使CD3+CD8+T淋巴细胞有显著的升高（P<0.05）,从而导致胺碘酮处理组CD3+CD4+/CD3+CD8+比值显著减少（P<0.01）。（4）胺碘酮（AMI）可浓度依赖性的抑制LPS激活的人淋巴细胞致炎性细胞因子IL-2、TNF-α和抗炎性细胞因子TGF-β1的分泌,提高抗炎性细胞因子IL-10的分泌。并对所测定的细胞因子产生的影响趋势一致。结论:胺碘酮阻断失活状态的Kv1.3通道,可能是其调节免疫功能的机制之一。胺碘酮对Kv1.5通道电流没有明显的阻断作用促使有效的开放状态的钾通道阻断剂如特异性的Kv1.5通道阻断剂应用于临床。第三部分替米沙坦和厄贝沙坦对电压依赖性的Kv1.3和Kv1.5通道电流的阻断作用目的:通过观察替米沙坦和厄贝沙坦对电压依赖性的Kv1.3和Kv1.5的阻断作用,探讨替米沙坦和厄贝沙坦对此类通道的阻断可能具有的临床作用。方法:使用双电极电压钳技术记录表达于非洲爪蟾卵母细胞的Kv1.3和Kv1.5钾通道电流,不同浓度灌流药物观察其对电流影响。结果:（1）替米沙坦和厄贝沙坦浓度依赖性的阻断Kv1.3通道,其阻断的IC50分别为2.05μM和2.46μM。两者对Kv1.3电流的阻断具有电压依赖性。（2）替米沙坦和厄贝沙坦浓度依赖性的阻断Kv1.5通道,其阻断的IC50分别为2.37μM和0.47μM。两者对Kv1.5电流的阻断也具有显著的电压依赖性。结论:替米沙坦和厄贝沙坦阻断开放状态的Kv1.3可能是其发挥免疫调节和抗动脉粥样硬化作用的机制之一;替米沙坦和厄贝沙坦对开放状态的Kv1.5钾通道的阻断可能是其具备减少房颤发生率的作用机制之一。
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