冠状动脉旁路移植术患者骨髓和循环祖细胞的临床研究

论文摘要

目的：缺血性心脏病是目前世界范围内主要的致死和致残疾病,常合并其他全身性疾病。骨髓和循环祖细胞在缺血性心脏病患者细胞治疗和再血管化治疗中起重要作用。本文主要研究1、冠心病患者围术期危险因素与骨髓单个核细胞（bone marrow mononuclear cells, BMMNCs）及骨髓祖细胞的关系；2、冠心病围术期危险因素与循环祖细胞的关系；3、冠状动脉旁路移植术对循环祖细胞的影响。方法：1.经胸骨骨穿采集44例患者骨髓,应用Ficoll淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离BMMNCs,计数并应用台盼蓝拒染法检测其活性,普通显微镜行形态学观察,用DAPI标记行荧光观察；应用流式细胞仪分析检测CD34+、CD133+和CD34+CD133+细胞的含量；应用集落形成试验和细胞迁移试验观察细胞功能。2.瞻性选择单纯行冠状动脉旁路移植术患者51名,在术中采集患者骨髓,于术前、术后第1天晨、术后第3天及术后第5天获得患者外周静脉血,应用流式细胞仪检测循环CD34+CD45dim细胞、CD133+CD45dim细胞和CD34+CD133+CD45dim细胞水平,应用集落形成试验和迁移试验离体评价骨髓和循环祖细胞的功能；应用Elisa试剂盒检测血浆G-CSF、SDF-1α和VEGF水平。结果：1.术中经胸骨抽取20ml胸骨骨髓可获到10-89×106个BMMNCs,台盼蓝染色拒染率95%以上,形态为均一大小的单个核细胞,等量的骨髓血获得的BMMNCs的量与患者年龄之间存在负相关关系（n=44,r=-0.788,p=0.001）；流式细胞仪检测CD34+细胞占0.94±0.39%,CD133+细胞占0.46±0.28%,CD34+CD133+细胞占0.53±0.26%,糖尿病患者骨髓CD34+和CD133+细胞水平明显较非糖尿病患者为低；高龄、女性和心功能较差与骨髓祖细胞集落形成能力降低有关,Euroscore评分可作为骨髓祖细胞集落形成能力降低的预测变量；CD34+细胞水平与骨髓单个核细胞的迁移能力存在明显的正相关。2.术前外周血循环中每10000个白细胞中含CD34+CD45dim细胞1.51±1.26,CD133+CD45dim细胞1.16±0.85,CD34+CD133+CD45dim细胞1.86±1.59。男性和吸烟患者CD34+CD45dim细胞水平较高,心功能较差的患者CD133+CD45dim细胞和CD34+CD133+CD45dim细胞水平较低；随着年龄增加,循环祖细胞的集落形成能力下降（r=-0.786,p<0.001）,应用他汀类药物的患者循环祖细胞的集落形成能力较强{7.48±3.04（33）vs5.50±2.71（18）,p=0.025},男性患者或合并外周动脉疾病或冠脉左主干疾病的患者外周血单个核细胞的迁移能力较高。3.无论是体外还是非体外冠状动脉旁路移植术,术后循环CD34+CD45dim细胞水平及CD133+CD45dim祖细胞水平均升高,并且体外循环手术后较非体外循环术后患者循环祖细胞水平变化大；循环祖细胞术后的升高伴随着细胞因子SDF-1α和G-CSF的升高,而骨髓单个核细胞的迁移能力与外周血动员的祖细胞水平之间存在明显的正相关。结论1.经胸骨应用密度梯度离心法可获得足够数量的BMMNCs作为缺血性心脏病治疗的供体细胞,年龄、性别、糖尿病、心功能及Euroscore评分与BMMNCs数量和功能有关。2.循环祖细胞水平在女性和心功能较差的患者较低,循环祖细胞的功能随着年龄的增加而降低,术前应用他汀类药物增强循环祖细胞功能。3.冠状动脉旁路移植术患者术后循环祖细胞水平升高,与血浆G-CSF和SDF-1α水平及骨髓单个核细胞迁移率有关。需要更进一步的研究证明动员的祖细胞是否参与了受损伤组织的再生修复

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分:围术期危险因素对骨髓祖细胞的影响
• 研究对象和材料
• 方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分:冠状动脉旁路移植术围术期骨髓和循环祖细胞的变化
• 研究对象和材料
• 方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 全文总结
• 综述 骨髓和循环祖细胞在缺血性心脏病的应用
• 参考文献
• 攻读学位期间发表文章目录
• 致谢