产AmpC酶阴沟肠杆菌的检测及其基因分析研究

论文摘要

目的 了解昆明地区阴沟肠杆菌的耐药现状及高产AmpC酶的表达对阴沟肠杆菌耐药性的影响。探讨昆明地区阴沟肠杆菌的耐药性与AmpC酶基因的关系。 方法 运用K-B法（纸片扩散）分析临床分离阴沟肠杆菌的耐药情况;采用头孢西丁三维试验、五种纸片表型筛选试验、氟氯西林双抑制剂扩散协同试验检测高产AmpC酶的表型表达;并通过聚合酶链反应（PCR）法检测结构基因ampC和调节基因ampD,对部分耐药菌株行DNA测序检测基因突变。 结果 74株阴沟肠杆菌除亚胺培南和头孢吡肟的敏感率较高（98.6%和86.5%）,对其他抗菌药物的敏感率低（63.5%以下）。三种方法检测高产AmpC酶分别为28.4%（21/74）、35.1%（26/74）、37.8%（28/74）,结果无显著性差异（P>0.05）。高产AmpC酶的菌株与非产酶菌株的耐药率具有显著性差异（P<0.05）。PCR扩增ampC和ampD基因阳性率分别为89.2%和86.5%。4株表型为高产AmpC酶菌株中ampC基因扩增产物序列与标准株ampCP99基因序列对比分析,核苷酸同源性均为99%,其推导的氨基酸序列除在58位由丙氨酸-脯氨酸（Ala-58→Pro）发生点突变外,其余均为同义突变。ampD基因的核苷酸与标准株E.cloacae14ampD基因序列进行对比分析发现存在突变点,相应位点的氨基酸突变点为Phe-63→Tyr,Ala-68→Ser,Met-101→Lys。 结论 昆明地区阴沟肠杆菌耐药状况严重,高产AmpC酶可能是导致临床分离阴沟肠杆菌对抗生素耐药的主要原因。五种纸片表型筛选试验和氟氯西林双抑制剂扩散协同试验可作为临床微生物实验室常规筛选AmpC酶的方法。ampC基因在阴沟肠杆菌中分布广泛,ampD基因突变可能与高产AmpC酶有关。

论文目录

• 一 论文摘要
• 中文摘要
• 英文摘要
• 二 正文
• 前言
• 第一部分
• 第二部分
• 参考文献
• 三 致谢
• 四 综述
• 五 在校期间发表论文
• 六 附录