新型番荔枝酰胺衍生物FLZ对去血清培养损伤星形胶质细胞的保护作用

论文摘要

目的FLZ是番荔枝叶提取物番荔枝酰胺的合成衍生物,前期研究表明,该化合物在脑缺血模型上具有神经保护作用。但FLZ对星形胶质细胞的作用研究尚少。近年研究表明,星形胶质细胞在中枢神经系统疾病中具有重要的生理和病理意义。去血清培养是体外用于模拟脑缺血的常用模型之一。S100B是一种主要表达在星形胶质细胞中的Ca2+结合蛋白,在急性中风、心脏停搏、蛛网膜下腔出血中也表现出敏感、特异性强的生物标记物特点。在去血清培养损伤引起的星形胶质细胞氧化应激过程中,S100B参与其中。胞外S100B作用于细胞膜受体可引起活性氧簇（reactive oxidative speciies,ROS）生成,并由此对细胞造成氧化应激损伤。因此本论文旨在研究FLZ对去血清培养引起的星形胶质细胞S100B过量分泌的作用,以及FLZ在由此引发的星形胶质细胞氧化应激中的作用。方法在去血清培养的原代大鼠脑皮层星形胶质细胞模型上,以MTT法检测细胞存活率,Hoechst 33342染色后观察细胞核形态变化,ELISA方法检测细胞培养液中S100B蛋白含量,DCFDA法检测细胞内ROS生成。生化法检测超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力,及丙二醛（MDA）与谷胱甘肽（GSH）含量。结果去血清培养致星形胶质细胞存活率显著下降（P<0.001）,FLZ（1×10-7mol/L、3×10-7 mol/L、1×10-6 mol/L、3×10-6 mol/L可提高去血清培养条件下星形胶质细胞的存活率。去血清培养致原代培养的大鼠脑皮层星形胶质受损细胞核明显增多（P<0.001）, FLZ各浓度均可减轻去血清培养造成的大鼠脑皮层星形胶质细胞核受损状况（P<0.001）。去血清培养4 h内,模型组星形胶质细胞培养液中S100B含量持续升高,4 h后与正常对照组相比明显增多（P<0.001）.FLZ（1×10-7 mol/L,1×10-6 mol/L）组星形胶质细胞S100B分泌量缓慢升高,4 h后分泌量显著低于模型组（P<0.001）。模型组细胞内ROS含量较正常对照组升高4.11倍,FLZ （1×10-7 mol/L-3×10-6 mol/L）可显著的减少去血清培养造成的星形胶质细胞内ROS的过度生成。去血清培养致原代星形胶质细胞内SOD活力明显下降（P<0.001）,脂质过氧化产物MDA明显增多（P<0.001）,GSH含量明显降低（P<0.001）,GSH-Px的活性升高P<0.01）。FLZ（3×10-7 mol/L-3×10-6 mol/L）可增加SOD活力,改善率分别为21%,41%,73%;减少MDA过量生成,改善率分别为39%,45%,63%；升高GSH含量,升高率分别为25%,33%,63%。（?）FLZ在1×10-7 mol/L、3×10-7 mol/L浓度下可逆转去血清损伤造成的GSH-Px活性变化,而1×10-6 mol/L和3×10-6 mol/L组对GSH-Px活性无明显影响。结论去血清培养致原代大鼠脑皮层星形胶质细胞损伤,FLZ对去血清培养损伤星形胶质细胞有明显的保护作用。FLZ通过减少去血清培养引起的S100B过度分泌从而降低ROS过度生成,增强细胞自身抗氧化系统,减轻去血清培养星形胶质细胞引起的氧化应激损伤。

论文目录

• 缩略词表
• 摘要
• Abstract
• 前言
• 实验材料与方法
• 1. 动物
• 2. 药品与试剂
• 3. 仪器和设备
• 4. 溶液配制
• 5 方法
• 5.1 大鼠脑星形胶质细胞的原代培养
• 5.2 星形胶质细胞的鉴定
• 5.3 MTT实验
• 5.4 原代星形胶质细胞去血清培养造模与加药处理
• 5.5 星形胶质细胞核受损百分比的测定
• 5.6 细胞外S100B含量的测定
• 5.7 细胞内活性氧簇（ROS）测定
• 5.8 MDA含量及SOD活性测定
• 5.9 GSH含量及GSH-Px活性测定
• 6. 数据统计与分析
• 实验结果
• 1. 星形胶质细胞免疫化学染色鉴定
• 2. FLZ对正常培养的星形胶质细胞存活率的影响
• 3. FLZ对去血清培养星形胶质细胞存活率的影响
• 4. FLZ对去血清培养星形胶质细胞外S100B含量的影响
• 5. FLZ对去血清培养星形胶质细胞内ROS含量的影响
• 6. FLZ对去血清培养星形胶质细胞内SOD活力及脂质过氧化的影响
• 7. FLZ对去血清培养星形胶质细胞内谷胱甘肽抗氧化系统的影响
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历