蜕皮甾酮乳膏的制备方法及量效分析

论文摘要

1背景伤口愈合过程,包括伤口早期止血、创面保护、炎症控制及多种组织细胞的增生,肉芽组织的形成,创缘的爬行收缩等。而内皮细胞、上皮细胞及成纤维细胞等细胞的增值是形成肉芽组织的关键,同时也是伤口愈合的关键。目前用于促进伤口愈合的外用药主要有:（1）伤口愈合填充膏:主要有填充伤口和防止感染的作用。（2）肤康宁:能够促进机体在伤口部位产生免疫细胞,有的因子能够“调配细胞”前往伤口处增援。（3）无推进剂喷雾状皮肤贴剂组合物:形成覆盖伤口的保护性薄膜,将生理活性成分或其前药运送至或穿透皮肤。（4）苯扎氯铵贴:主要作用为杀菌、止血、护创。（5）云南白药创可贴及其粉剂:显著提高血小板聚集,对抗组织肿胀,促进成纤维细胞生长因子（bEGF）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达,但其主要还是以止血消肿的早期治疗为主,中后期的促进内皮细胞生长作用相对较小。以上促愈外用药品种类有限,且主要以抗炎、止血、保护创面为主,但这些作用只对创伤早期有效。而对真正体现伤口愈合速度的促进各种组织细胞增值的作用较小。本研究的目的就是希望在这方面有所突破。蜕皮甾酮（ecdysterone,B-ecdysone,亦称β-蜕皮激素,简称蜕皮素）)属于昆虫生长代谢调节激素,最早为昆虫学家所研究。昆虫、甲壳动物及其它节肢动物具有韧硬的角质层外壳,定期分泌蜕皮激素将角质层外壳淘汰并代之以新的一层,这个过程就谓之蜕皮或蜕皮作用。但人们发现,蜕皮激素在植物界的分布不仅较动物界广,而且含量较高,资源丰富,迄今还不断地在植物界发现昆虫蜕皮甾酮类物质,这类植物源蜕皮甾酮已近160个。目前蜕皮激素的应用仍依赖于从植物中提取。蜕皮甾酮在脊椎动物中也是必需的物质,对机体功能影响较大。目前所知其作用机理主要为:1)、促进蛋白质合成;2)、调节糖代谢;3)、调节脂代谢;4)、调节基因表达;5)、改善免疫功能;6)、中枢神经系统作用;7)、作用于心血管系统;8)、促进愈合作用等。目前尚无关于蜕皮甾酮的乳膏制剂类型的研发和报道。2目的研究把蜕皮甾酮单体粉剂制成使用方便、易携易带、经济节省的乳膏制剂的方法及其对实验性兔创伤模型促愈作用的量效分析,从而得出蜕皮甾酮乳膏促进伤口愈合的最佳有效浓度。3方法3.1蜕皮甾酮乳膏的制作取单硬脂酸甘油酯、硬脂酸、白凡士、氮酮、羟苯乙酯水浴加热至90℃,使熔融,制成油相;另取纯化水、硼砂、十二烷基硫酸钠、三乙醇胺、甘油、尿囊素水浴加热至90℃,制成水相。将油相混合液缓缓加入水相混合液中,边搅拌边加入溶解于100%甲醇的某一浓度的蜕皮甾酮溶液。连续搅拌30min后,通过高剪切混合乳化机以2000-6000r/min-1的转速搅拌下乳化成型,灌装,即得此种浓度的蜕皮甾酮乳膏。同法制备成其他三种浓度的蜕皮甾酮乳膏。并行紫外分光光度法测定蜕皮甾酮含量以监控乳膏质量,使其符合《中国药典》相关要求。3.2蜕皮甾酮乳膏的量效分析将11只体重相近的新西兰兔制备成全皮层缺损的创伤动物模型,每只兔5个背部创面,分别敷以空白乳膏基质及四种浓度的蜕皮甾酮乳膏。其中8只兔,分别于造模后4d、8d、12d,拍摄愈合后的创面,测量其面积,同时计算出各个创面的伤口愈合率,作为统计学计数指标;另外3只兔,分别于造模后4d、8d、12d取其创面组织行病理学观察,作为描述性指标。4结果4.1蜕皮甾酮乳膏的制作根据一系列的质量检测,说明本乳膏制剂性状稳定:通过紫外分光光度法测量其蜕皮甾酮含量及回收率、精密度的结果分析说明蜕皮甾酮在乳膏制备过程中的性状未发生改变（标准品溶液和空白对照品溶液的紫外光吸收峰未发生干扰和重叠）,其含量变化在控制范围内未发生大的改变（通过回收实验及日内、日间精密度测量已证明）。4.2蜕皮甾酮乳膏的量效分析伤口愈合率的统计学分析表明:蜕皮甾酮乳膏有明显的促进伤口愈合的作用（P＜0.01）,最佳有效浓度为2.5%。病理学观察显示:2.5%蜕皮甾酮乳膏组创面较其他四组肉芽组织形成明显,上皮细胞、内皮细胞及成纤维细胞增生较多。本研究通过比较空白对照组（赋形剂组）及四种浓度的蜕皮甾酮乳膏组伤口的愈合率,可以看出:伤口愈合早期（4d）,各组间差异不大,此时伤口主要处于炎症水肿期,创面以充血渗出为主,各种组织细胞的增值只是在起始阶段,所以即使有外用药帮助,对伤口愈合速度影响不大;而在伤口愈合中期（8d）,各种组织细胞处于快速增值阶段,这时外用药的促愈作用体现的比较明显,可以看出2.5%蜕皮甾酮乳膏的伤口愈合明显快于其他各组;而随着愈合时间的延伸（12d）,只涂抹乳膏基质的空白对照组（赋形剂组）的劣势越来越明显,其伤口愈合明显慢于其他各组,相反,2.5%蜕皮甾酮乳膏组的愈合速度还是明显优于其他各组,但领先1.25%蜕皮甾酮乳膏组的优势已没有原来那么大。通过此研究可以看出:蜕皮甾酮乳膏确实有促进创伤愈合的作用,且2.5%蜕皮甾酮乳膏在创伤动物模型实验中促愈效果最好,为其最佳有效浓度。本实验中,通过病理切片观察,空白对照组创面炎细胞大量渗出,肉芽组织形成及上皮细胞增生缓慢。而2.5%蜕皮甾酮乳膏组肉芽组织生长速度最快,上皮细胞、内皮细胞和成纤维细胞的快速增值,使上皮爬行速度增快,新生的毛细血管较多,胶原形成明显,创面于创伤后12d基本愈合。5结论目前国内促进伤口愈合的药物有限,且主要以抗炎、止血、保护创面为主,但这些作用只对创伤早期有效,而对真正体现伤口愈合速度的促进各种组织细胞增值的作用较小。本药却正是以促进伤口各种组织细胞增值为主要作用机理。实验证明蜕皮甾酮乳膏对实验性兔创伤模型有明显促愈作用,且其最佳有效浓度为2.5%。所以,通过本药的研发,可以提供和拓展临床伤口愈合新途径及新机理的研究。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 蜕皮甾酮乳膏的制备方法及量效分析
• 1.1 前言
• 1.1.1 关于伤口愈合
• 1.1.2 关于蜕皮甾酮
• 1.2 目的
• 1.3 材料
• 1.3.1 动物
• 1.3.2 药物
• 1.3.3 仪器
• 1.3.4 软件
• 1.4 方法
• 1.4.1 乳膏制备方法
• 1.4.1.1 制备程序
• 1.4.1.2 质量检测
• 1.4.1.3 浓度测定
• 1.4.2 量效分析方法
• 1.4.2.1 浓度选择
• 1.4.2.2 动物模型
• 1.4.2.3 实验分组
• 1.4.2.4 指标检测
• 1.4.2.5 统计方法
• 1.5 结果
• 1.5.1 乳膏制剂的制作
• 1.5.2 量效分析结果
• 1.5.2.1 伤口愈合率比较
• 1.5.2.2 肉眼观察
• 1.5.2.3 显微观察
• 1.6 讨论
• 1.6.1 关于乳膏制作
• 1.6.2 动物模型的选择
• 1.6.3 评价指标的选择
• 1.6.4 蜕皮甾酮乳膏与伤口愈合
• 1.7 结论
• 1.8 附图
• 1.7.1 图1-6 8天后光镜下各组伤口的组织形态学观察
• 1.7.2 图1-7 12天后光镜下各组伤口的组织形态学观察
• 1.7.3 图1-8 8天后电镜下各组伤口的组织形态学观察
• 1.7.4 图1-9 12天后电镜下各组伤口的组织形态学观察
• 1.7.5 图1-10实验过程图解
• 1.7.6 图1-11实验过程图解
• 1.9 参考文献
• 第二章 附录
• 2.1 缩略词表
• 2.2 综述
• 2.3 统计学审稿证明
• 第三章 攻读硕士学位期间成果
• 3.1 发明专利
• 3.2 发表论文
• 第四章 致谢