羊驼禽传染性支气管炎样病毒的研究

论文摘要

对一例病死羊驼剖检发现,羊驼的部分实质性器官如肺、肝、肾、脾等发生了病变,并在肺组织的超微结构中发现了病毒,大小为80nm。从病毒形态、大小以及南美驼病毒性疾病史分析,该病毒疑似冠状病毒。进一步通过RT-PCR获取目的基因,分析基因序列,为以后羊驼疾病的预防和治疗奠定基础。 RT-PCR扩增到的基因片段克隆到pMD-18T载体中,获得了该基因的克隆质粒。测序结果表明该片段大小为723bp（GenBank登录号为AY939836）,含有一个完整的ORF,编码229个氨基酸。同源性分析结果表明,在禽传染性支气管炎病毒株膜蛋白（Membrane Protein）基因中发现同源序列,核苷酸序列的同源性为92%-99%,氨基酸序列同源性达87%-92%。根据国际基因组命名委员会的命名原则,该基因命名为羊驼禽传染性支气管炎样病毒（Avian Infectious Bronchitis Virus like in alpaca）基因。对氨基酸序列分析显示:该基因编码的蛋白质含有疏水性区域、3个跨膜区、2个蛋白激酶C的磷酸化位点、1个N-糖基化位点,1个亮氨酸拉链结构、6个N-十四酰基化位点,没有信号肽。该病毒膜蛋白氨基酸序列的5’端比其他同源毒株氨基酸序列的5’端多16-19个氨基酸。该毒株与国外毒株Conn的亲缘关系最近,核苷酸与氨基酸序列的同源性分别为99%和92%,其氨基酸序列与Conn相比仅有一个突变点,位于第204位氨基酸I（异亮氨酸）→T（苏氨酸）。氨基酸序列对齐分析表明有两个保守区,分别位于131-158AA和160-204AA。 通过病理组织学观察和对获得的基因进行有效的生物信息学分析,得出以下结论: 1.本试验通过对病死羊驼进行病理组织学分析和病原体的分离与鉴定,推断羊驼感染了冠状病毒。 2.本试验首次从羊驼体内获取了禽传染性支气管炎样病毒的膜蛋白基因,并克隆到了pMD-18T载体中,获得了膜蛋白基因的克隆质粒。经序列分析,与禽传染性支气管炎病毒属同一基因型。 3.进行了膜蛋白基因及其氨基酸的序列分析:该基因与禽传染性支气管炎病毒不同毒株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为92-99%和87-92%;与国外毒株conn亲缘关系最近,因此在功能上有很大的相关性。 4.通过序列的功能位点分析,该病毒可能对羊驼具有致病性。

论文目录

• 摘要
• 前言
• 实验材料与方法
• 1 材料来源
• 2 主要试剂
• 3 实验方法
• 实验结果
• 1 病理剖解及组织学观察
• 2 病原体的分离与鉴定
• 3 分子生物学研究
• 分析与讨论
• 结论
• 参考文献
• 英文摘要
• 附图