以羊膜为载体培养子宫内膜细胞的实验研究

论文摘要

目的：初步探索人羊膜作为载体种植人子宫内膜细胞的可行性,为探索子宫内膜重建提供有效和来源丰富的移植材料和良好方法。方法：制备保留上皮细胞的人羊膜支架与胰酶消化去除羊膜上皮细胞的羊膜细胞外基质支架,将体外扩增传代的子宫内膜细胞分别种植在以上两种支架上,体外培养形成单层,通过倒置显微镜观察、比较细胞在羊膜支架与羊膜细胞外基质支架上的细胞分布、生长形态及差异。结果：子宫内膜细胞在羊膜细胞外基质支架上接种12小时后细胞粘附基质,呈小圆球状、散在分布、折光性较好。培养24～48小时后,细胞出现明显增殖,逐渐聚集成团、成片样生长,与培养皿上生长增殖的子宫内膜细胞形态相似,但细胞排列欠规则,细胞较扁平,细胞与细胞之间连接紧密,并有细胞拉长,相互交通。3～4周羊膜开始皱缩,细胞增殖不明显,细胞质变暗。子宫内膜细胞在羊膜支架上接种18～20小时后细胞粘附基质,细胞贴壁也较晚6～8小时,细胞形态、分布、凋亡时间与羊膜细胞外基质支架上的细胞相似。结论：1.羊膜作为支架负载子宫内膜细胞具有一定的可行性。2.子宫内膜细胞在羊膜细胞外基质支架与羊膜支架上的形态、分布光镜下无明显差别,但细胞在羊膜细胞外基质上更易粘附,增殖更明显。3.羊膜细胞外基质支架可能成为子宫内膜组织工程研究的新型支架材料。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 英文缩略词表
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 标本采集
• 2.1.2 试剂
• 2.1.3 主要仪器与设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 子宫内膜细胞的培养
• 2.2.2 子宫内膜细胞的细胞免疫荧光鉴定
• 2.2.3 人羊膜支架的制作
• 2.2.4 将体外传代的子宫内膜细胞分别种植于羊膜细胞外基质支架与羊膜支架上培养
• 2.2.5 观察与检测
• 第三章 结果
• 3.1 体外原代、传代培养子宫内膜细胞的形态学观察及原代细胞的免疫荧光鉴定
• 3.2 肉眼和光镜下观察羊膜细胞外基质支架与羊膜支架形态
• 3.3 体外传代的子宫内膜细胞在羊膜细胞外基质支架和羊膜支架上的细胞形态及生长情况
• 3.3.1 P2代子宫内膜细胞种植在羊膜细胞外基质支架上
• 3.3.2 P2代子宫内膜细胞种植在羊膜支架上
• 附图
• 第四章 讨论
• 4.1 羊膜支架的优越性
• 4.2 体外传代混合培养子宫内膜细胞的意义
• 4.3 展望
• 第五章 结论
• 参考文献
• 第六章 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果