丹参种质多成分评价及丹参四个关键酶基因不同组织表达分析

论文摘要

本论文包括两部分内容：(1)建立了同时对丹参中的2个脂溶性成分和3个水溶性成分进行含量测定的简单准确的高效液相色谱方法,运用该方法分析了丹参11个无性系材料中5种活性成分的含量,比较了丹参木质部和皮部、不同根径粗细以及不同根色中这5种成分的含量；(2)运用荧光定量PCR法对丹参酮类生物合成途径中的SmAACT, SmDXR, SmHMGR和SmCPS四个基因在丹参不同器官中的表达进行了分析。主要研究内容：①综述了丹参的化学成分和丹参酮类化合物生物合成途径关键酶基因的研究现状；②建立了同时测定2种脂溶性成分和3种水溶性成分的HPLC方法,所建方法重复性、精密度和稳定性良好；③对不同产地、不同种质丹参进行品质分析；④对丹参不同部位、不同根茎粗细以及不同根色进行研究；⑤通过荧光定量PCR对SmAACT、SmHMGR、SmDXR和SmCPS 4个基因的表达进行研究。研究结果表明：丹参无性系材料中脂溶性成分和水溶性成分含量有较大差别,江苏野生(DC003)、河南野生(DC004)和河南禹州(DC007)三个地区样品水溶性总含量比较高；河南禹州(DC007)样品脂溶性成分总含量最高,对数据进行方差分析结果显示,不同无性系材料丹参素、丹酚酸B和丹参酮IIA的含量达到显著性差异。DC003、DC004、DC007这三个品系可以作为原始材料来进行杂交以筛选出水溶性和脂溶性成分均较高的丹参种质；对丹参不同部位、不同根茎粗细以及不同根色的研究结果显示：皮部中丹参素、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮IIA含量均高于木质部；丹参根直径越细,隐丹参酮和丹参酮IIA含量越高,但丹酚酸B含量越低,而原儿茶醛的含量在芦头中含量最高；丹参根粉末颜色越趋近红色,而且颜色越深,其脂溶性成分含量就越高,水溶性成分含量也较高。另外从4个基因的表达结果推测SmCPS在丹参酮类化合物生物合成途径中起调控作用。本文建立了同时测定丹参中的3种水溶性成分和2种脂溶性成分的方法,为多组分评价不同来源丹参药材质量提供了一种快速方法。应用该方法对丹参不同种质不同部位、不同根径粗细、不同根色中有效成分进行比较研究,为丹参新品种选育、GAP规范化栽培以及各药企业选用丹参原药材提供理论依据。本文对丹参酮生物合成途径的4个关键酶基因表达模式的研究,有利于人们在转录水平更清楚了解丹参酮生物合成途径的分子机制,为丹参中丹参酮生物合成的调控奠定理论基础。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 第1章 文献综述
• 1.1 丹参有效成分
• 1.2 丹参有效成分的生物合成途径及调控
• 1.3 结语
• 第2章 丹参无性系材料及目标性状评价
• 2.1 丹参无性系材料中5个有效成分的含量测定
• 2.2 丹参根不同部位、粗细及根色的5种有效成分含量比较
• 2.3 小结
• 第3章 丹参酮类生物合成途径关键酶基因的表达研究
• 3.1 看家基因的筛选
• 3.2 SmAACT、SmDXR、SmHMGR和SmCPS在丹参不同器官中表达的荧光定量PCR分析
• 3.3 结果与分析
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间的研究成果
• 附图