结直肠癌患者CK19基因及血浆CEA、CA199联合检测的实验研究

论文摘要

结直肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤。在西方发达国家,结直肠癌发病率在所有恶性肿瘤中位居第三位。近年来,随着饮食习惯改变和生活水平的提高,我国结直肠癌发病年龄明显提前,发病率呈上升趋势。上海、北京等大城市的发病率增速已远超西方国家。结直肠癌有较高的死亡率,在我国常见恶性肿瘤死亡率排名表中,结直肠癌男性死亡率占第五位,女性死亡率占第六位。我国每年因结直肠癌死亡人数达20至30万人。现在结直肠癌的治疗技术不断完善、提高,但我国结直肠癌患者5年生存率仍在50%左右。究其原因,大部分患者就诊时已是中晚期。虽然目前有诊断结直肠癌的金标准：即在结肠镜下,对病变组织取材进行病理学诊断。但其存在局限性：（1）它是一种有创性操作,易引起胃肠穿孔、出血等严重并发症。一部分患者由于身体状况差,无法耐受；一部分患者由于对结肠镜检查存在恐惧心理,不愿检查。（2）病理学检查虽然较成熟,但其准确性受取材部位、取材量,病理医师水平等因素制约。因此寻找简单较好的诊断指标,对结直肠癌进行早期诊断、预后判断、疗效评价及复发监测,具有非常重要的意义。肿瘤标志物是由肿瘤组织自身产生,可反映肿瘤存在和生长的一类生化物质。它具有检测简单,病人痛苦小,费用低等优点,广泛用于肿瘤的检测和预后判断。但单一标志物检测敏感性较低,易引起漏检；多种标志物联合检测可提高敏感度。CEA和CA199是临床检测结直肠肿瘤患者复发的常用标志物；CK19mRNA用于肺癌、乳腺癌的转移检测已有报道,用于结直肠癌的诊断、监测复发报道较少。本研究探讨肿瘤标志物CK19mRNA、CEA和CA199联合检测在结直肠癌的诊断、预后和随诊中的价值。本实验结果提示：CEA、CK19mRNA和CA199有望成为监测结直肠癌的理想标志物组合。目的探讨联合检测CK19基因及血浆CEA、CA199对结直肠癌患者的诊断,预后及随诊的临床应用价值。材料与方法1病例的选择与标本的收集选取2008年6月-2009年6月间,均经组织病理检查确诊的结直肠癌患者76例,男性40例,女性36例,年龄30-82岁,中位年龄60.2岁；根据Dukes分期标准进行手术分期,其中A期16例,B期22例,C期38例；病理分型：管状腺癌40例,乳头状腺癌31例,其他5例。20例康献血员,男性12例,女性8例,平均年龄37.6岁。35例结直肠良性疾病患者,男性19例,女性16例,平均年龄40.2岁。分别抽取外周血3m1,肝素抗凝待检。2方法76例结直肠癌患者、35例结直肠良性疾病患者及20例健康献血员,以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测外周血CK19mRNA表达；以电化学发光法检测血浆CEA、CA199的水平。所得结果采用spss13.0统计软件包进行数据统计分析。3结果3.1结直肠癌者CK19mRNA及血清CEA、CA199单项检测阳性率显著高于对照组结直肠癌组外周血CK19mRNA和血浆CEA、CA199的阳性检出率（分别为52.6%,44.7%,23.7%）明显高于结直肠良性疾病组（分别为8.6%,5.7%,8.6%）和健康对照组（0.0%,5.0%,5.0%）（P<0.05）；良性结直肠疾病组与健康对照组相比无显著性差异（P>0.05）,提示CK19mRNA.CEA、CA199是诊断结直肠癌的较好检测指标。3.2CK19mRNA及血浆CEA、CA199联合检测显著提高结直肠癌的诊断效率CK19mRNA单项检测灵敏度较高,为52.6%。除CK19mRNA指标外,二联检测灵敏度均比单一指标有显著性差异（p<0.05）；三联检测灵敏度比单联检测灵敏度差异极显著（p<0.01）。三联检测的灵敏度、阴性预测值、约登指数最高,分别为80.3%,76.2%,0.68；三联检测特异度、阳性预测值,较单联检测无显著性差异（P>0.05）。显示三联检测对结直肠癌有较好的临床诊断价值。3.3CK19mRNA.CEA和CA199三指标联检能更好的指导结直肠癌患者dukes分期各期CK19mRNA.CEA、CA199三指标联检阳性率比单一指标阳性率有显著性差异（P<0.05）,CK19mRNA.CEA、CA199三指标联检：C期患者显著高于B期和A期,不同分期间均有显著性差异（P<0.05）。提示,三联检测可更好的指导结直肠癌分期。3.4CK19mRNA.CEA、CA199联合检测能更好的评价结直肠癌患者治疗效果各阶段CK19mRNA.CEA、CA199三指标联检阳性率比单一指标阳性率有显著性差异（P<0.05）,各指标单一检测或联合检测术前和综合治疗后阳性率有显著性差异（P<0.05）,显示,三联检测能更好的进行疗效评价。1.5CK19mRNA.CEA、CA199联合检测显著减少结直肠癌患者手术后远处转移复发的漏检率对76例结直肠癌患者连续随访24个月,随访率100%。用CK19mRNA.CEA、CA199检测结直肠癌患者在不同阶段随访中的复发率,发现结直肠癌患者CK19mRNA、CEA、CA199检测阳性者与阴性者在随访的相同阶段复发率有显著性差异；各单一指标检测结直肠癌患者复发率与三指标CK19mRNA.CEA、CA199联合检测没有显著性差异（P>0.05）。但联合检测可提高结直肠患者的阳性检出率,从而防止复发漏检。三指标CK19mRNA.CEA、CA199联合检测结直肠癌患者的不同随访时间段复发率,发现术后12个月、术后18个月与术后24个月之间的复发率均有显著性差异（p<0.05）。在结直肠癌患者随诊中联合检测CK19mRNA、CEA、CA199指标很有价值。结论CEA、CK19mRNA和CA199是监测结直肠癌的理想标志物组合,可起到互补作用,明显提高检测的灵敏度和约登指数；能较好的提高结直肠癌患者的阳性率,帮助临床大夫选择合理的治疗方案,评价结直肠癌患者的治疗效果,综合判断预后,在随诊中及早发现复发。从而提高结直肠癌患者的治愈率,降低死亡率。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 符号说明
• 前言
• 技术路线
• 1 材料
• 1.1 主要试剂
• 1.2 一般试剂
• 1.3 主要实验仪器
• 2 方法
• 2.1 病例及对照人群的建立
• 2.2 外周血肿瘤标记物CEA及CA199的检测
• 2.3 RT-PCR法测定外周血CK19mRNA表达水平
• 2.4 CK19mRNA与CEA、CA199联合检测结直肠癌诊断效率评价
• 2.5 统计学方法
• 3 结果
• 3.1 成功建立特异性检测CK19基因片段的灵敏实验体系
• 3.2 结直肠癌患者外周血CK19 mRNA及血浆CEA和CA199水平均显著高于对照组
• 3.3 CK19mRNA单项检测有较高的结直肠癌检测灵敏度,与其它两种指标联合应用能显著提高结直肠癌的诊断效率
• 3.4 CEA、CA199和CK19mRNA三指标联检能更好指导结直肠癌患者dukes分期
• 3.5 联合检测CEA、CA199和CK19mRNA指标更能评价治疗效果
• 3.6 结直肠癌患者随诊中联合检测CEA、CA199和CK19mRNA指标更有意义
• 4 讨论
• 小结
• 展望
• 参考文献
• 原始数据
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 学位论文评阅及答辩情况表