论文摘要
前言肿瘤的转移是肿瘤细胞与宿主细胞间及宿主细胞间一系列复杂、多步骤相互作用的结果，此过程涉及多种基因及其产物的作用。近年来相继克隆出多种与肿瘤转移相关的基因。其中MTA1基因是研究较多的肿瘤转移基因，其编码的蛋白MTA1（Metastasis-associated protein 1）在多种肿瘤细胞系中表达，与肿瘤转移密切相关。MTA1在正常组织中的表达很有限，而在多种肿瘤中呈现高表达，但这种表达改变的普遍性及其对判定肿瘤的生物学特性和评估预后的意义仍有待于进一步研究。且目前关于MTA1与雌激素受体（ER）之间在非小细胞肺癌（NSCLC）中的关系研究未见报道，为此，本实验对人NSCLC组织中MTA1的表达情况及其与ER和患者术后生存时间的关系进行分析，以探讨MTA1在人NSCLC的转移及患者预后评估中的作用和意义。材料与方法一、材料101例NSCLC组织蜡块来自1980年到1994年间中国医科大学附属第一医院手术切除的组织；同时取相应的癌旁正常肺组织做对照。所用组织均经福尔马林固定，常规石蜡包埋。35例新鲜NSCLC组织及癌旁正常肺组织取自中国医科大学附属第一临床医院胸外科2006年4月到8月间手术切除的标本。二、主要试剂羊抗人MTA1多克隆抗体（SC-9446）和羊抗人ER多克隆抗体（N-19）购自Santa Cruz公司，S-P超敏试剂盒（KIT-9707）购自福州迈新生物技术开发公司。兔抗人多克隆anti-β-actin抗体（PR-0255）购自中山生物技术有限公司，生物素标记的兔抗羊IgG二抗（ZB-2306）和DAB酶底物显色试剂盒（ZLI-9032）均购于北京中杉金桥生物技术有限公司。三、方法（一）免疫组织化学染色按链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶（S-P）法行抗MTA1（1：300）和抗ER（1：100）免疫组织化学染色。切片常规脱蜡至水，高温高压进行抗原修复，一抗4℃孵育过夜，DAB显色，苏木素复染。用PBS代替一抗作为阴性对照。结果判定：阳性细胞核内见棕黄色颗粒。光镜下每张切片在诊断确实的肺癌组织中随机选取10个高倍视野，每个视野计数100个细胞。切片内阳性细胞数＞10％为MTA1或ER阳性表达。（二） Western Blot法于4℃下取等量标本（1-2克）加大约5倍湿重的裂解缓冲液，粉碎匀浆超声处理后，4℃静置24小时，低温高速离心，提取上清即为总蛋白。电泳、转印、小牛血清封闭后加入相应的一抗、二抗，DAB显色。结果判定为转印膜上出现灰色条带，并对条带进行灰度值测定。四、统计学分析应用SPSS13.0统计分析软件，对MTA1表达和临床病理特征的关系用Spearman相关分析，对MTA1与ER表达关系用x2检验和Spearman相关分析；Western Blot实验结果采用t检验；生存分析采用Kaplan-Meier法，log-rank检验判断差异性；用COX模型进行多因素分析，P＜0.05为有统计学意义。结果一、MTA1在非小细胞肺癌及癌旁正常肺组织中的表达101例非小细胞肺癌组织中56例癌细胞核中出现MTA1阳性表达，而MTA1在相应的癌旁组织中的支气管上皮和肺泡上皮中为阴性表达。对35例新鲜NSCLC组织及相应癌旁组织的Western Blotting分析结果显示：MTA1在NSCLC和癌旁组织中均有表达，分子量约为80kDa，但在癌组织中的表达明显高于癌旁组织，而且有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组。二、MTA1的表达与患者临床病理特征的关系MTA1的表达与分化程度负相关，与临床分期和淋巴结转移正相关，而与患者的年龄、性别、组织分型无明显关系。三、MTA1与ER的关系101例NSCLC组织中，MTA1阳性表达组的ER阴性表达；MTA1阴性表达组的ER阳性表达，经x2检验两者差异有显著性，经Spearman相关分析两者表达呈负相关。四、MTA1的表达与患者预后的关系Kaplan-Meier生存曲线分析及Log-rank检验显示，MTA1阳性表达组患者的5年生存率明显低于阴性表达组，MTA1阳性表达ER阴性表达组患者的5年生存率明显低于MTA1阴性表达ER阳性表达组；Cox多因素分析结果显示：肺癌的淋巴结转移和临床分期均可作为影响肺癌预后的有意义的风险因素，而MTA1和ER表达尚不能作为影响预后的独立风险因素。讨论一、MTA1与非小细胞肺癌转移的关系最新的研究发现分子量为80KD的MTA1是核小体重构及组蛋白脱乙酰基复合物（NuRD）的一个亚单位，在肿瘤的侵袭和转移中起作用。相继有研究报道了其在乳腺癌、食管癌、卵巢癌、肝癌和肠癌中表达升高，并且在卵巢的淋巴结转移灶中MTA1的表达明显高于原发灶和正常上皮。本研究结果显示，MTA1在非小细胞肺癌组织中高表达，其高表达与淋巴结转移和临床分期呈正相关，与分化程度呈负相关。提示MTA1能促进肺癌的生长和转移。二、MTA1的表达与雌激素受体ER的关系有研究发现MTA1在乳腺癌中通过ER-Snail-E-cadherin通路，最终导致E-cadherin下调来促进乳腺癌细胞侵袭转移。我们的研究结果显示：MTA1和ER的表达在非小细胞肺癌组织中呈负相关，提示MTA1可能通过抑制ER表达来促进肺癌的转移。三、MTA1表达和非小细胞肺癌预后的关系有研究表明食管癌和肝癌的不良预后与MTA1过表达有关。我们的研究发现：MTA1阳性表达的非小细胞肺癌患者的术后生存期较MTA1阴性表达的患者短，且二者差异有显著性；MTA1阳性表达ER阴性表达患者术后生存期较MTA1阴性表达ER阳性表达的患者术后生存期短，差异有显著统计学意义。但是多因素分析显示术后生存期仅与非小细胞肺癌的淋巴结转移和临床分期密切相关，而与MTA1表达及ER表达无关，证明MTA1和ER尚不是影响非小细胞肺癌预后的独立因素。结论1、MTA1在非小细胞肺癌中高表达，且与淋巴结转移和临床分期呈正相关，与分化程度呈负相关。2、MTA1的表达与ER呈负相关。3、MTA1阳性表达的非小细胞肺癌患者预后差，MTA1阳性表达ER阴性表达患者预后更差，MTA1和ER可以作为判断肺癌患者预后的参考指标。